牛多杀性巴氏杆菌通过NF-κB/MAPK-NLRP3/NLRP6诱导炎症反应研究
发布时间：2022-01-14 14:54
牛多杀性巴氏杆菌是一种能引起牛出血性败血症和牛肺炎的重要病原,给肉牛养殖带来了巨大的经济损失。根据其荚膜抗原不同可分为A、B、D、E、F等5种血清型,其中血清B和E型主要导致牛出血性败血症,血清A和F型主要引起牛呼吸系统疾病,导致牛肺炎。近年来,随着肉牛养殖的迅速发展,肉牛的频繁调运导致的运输应激致使牛多杀性巴氏杆菌病的流行呈上升趋势。目前,我们对牛多杀性巴氏杆菌致病机制还知之甚少,同时针对这方面的研究也较少,本文拟通过研究牛多杀性巴氏杆菌诱导细胞炎性的信号通路,探讨牛多杀性巴氏杆菌的致病机制,为牛多杀性巴氏杆菌病新的控制策略及新型疫苗研发提供思路。本实验以牛多杀性巴氏杆菌A型（Pm A）和B型（Pm B）菌株分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过q RT-PCR、Western Blot、ELISA等技术手段研究其炎症机制,其主要目标为:（1）在体外条件下,探究Pm A和Pm B是否可以诱导巨噬细胞的炎性反应;（2）Toll样受体是否参与炎症信号通路的激活;（3）NF-κB、MAPK信号通路是否参与了炎症信号通路的调节;（4）炎性小体是否参与炎症信号通路的调节;（5）细胞吞噬作用...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 牛多杀性巴氏杆菌概述
1.1.1 牛多杀性巴氏杆菌病
1.1.2 牛多杀性巴氏杆菌致病机制
1.2 炎症机制
1.2.1 炎症反应
1.2.2 炎症反应的重要核心–IL-1β
1.2.3 TNF-α
1.2.4 炎性小体
1.3 NF-κB信号通路与炎症反应
1.4 MAPK信号通路与炎症反应
1.4.1 JNK信号通路
1.4.2 P38信号通路
1.5 Toll样受体与炎症反应
1.5.1 TLR2
1.5.2 TLR4
1.6 细胞吞噬作用对炎症信号通路的影响
第二章 引言
2.1 研究目的及意义
2.2 研究的主要内容
2.2.1 Pm A、Pm B诱导细胞的炎症反应
2.2.2 Pm A、Pm B诱导细胞炎症反应与Toll样受体的关系
2.2.3 Pm A、Pm B诱导细胞炎症与NF-κB、MAPK信号通路关系
2.2.4 Pm A、Pm B诱导细胞炎症反应与炎性小体的关系
2.2.5 NF-κB、MAPK信号通路与炎性小体
2.2.6 细胞吞噬作用与Pm A、Pm B诱导炎症信号通路的激活
2.3 技术路线
第三章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 细胞
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 Pm A、Pm B的培养及PCR鉴定
3.2.2 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养
3.2.3 样本的制备
3.2.4 提取小鼠巨噬细胞RAW264.7 总RNA
3.2.5 c DNA的合成
3.2.6 SYBR Green I实时定量PCR
3.2.7 ELISA的检测
3.2.8 Western Blot检测目的蛋白在巨噬细胞中的表达
3.2.9 数据分析
第四章 结果与分析
4.1 Pm A、Pm B的培养及PCR鉴定
4.2 q RT-PCR扩增曲线和熔解曲线
4.3 Pm A、Pm B诱导炎症反应
4.4 TLR2、TLR4介导炎症信号通路的激活
4.5 NF-κB、MAPK信号通路参与炎症信号通路的激活
4.6 炎性小体参与Pm A、Pm B诱导的炎症信号通路
4.6.1 炎性小体接头蛋白ASC的激活
4.6.2 Pm A、Pm B诱导炎症信号通路的激活依赖于Caspase-1
4.6.3 NLRP3、NLRP6参与Pm A、Pm B诱导的炎症反应
4.7 NF-κB、MAPK信号通路参与调控NLRP3、NLRP6炎性小体
4.8 细胞吞噬作用参与炎症信号通路的激活
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]炎性小体在脂多糖诱导小鼠巨噬细胞中的表达及大黄素干预作用[J]. 孙晓琦,方南元,薛博瑜. 中华中医药杂志. 2015(10)
[2]IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平[J]. 金国玺,张燕,毕娅欣,于磊. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(09)
[3]牛多杀性巴氏杆菌疫苗研究进展[J]. 谢倩茹,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国奶牛. 2015(15)
[4]血必净注射液对缺氧/复氧大鼠心肌TLR4—NF-κB—TNF-α通路的影响[J]. 刘亚坤,何金波,陈海娥,陈丹,苗亚飞,应磊,游昕,王万铁. 中国中西医结合杂志. 2014(12)
[5]Role of NLRP3 and NLRP1 inflammasomes signaling pathways in pathogenesis of rheumatoid arthritis[J]. Tao Wang,Chang-Liang Zhu,Shuai Wang,Li-Wen Mo,Guo-Dong Yang,Jun Hu,Fan Zhang. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(10)
[6]疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究[J]. 龚享文,杨钦河,闫海震,张玉佩,梁荫基,刘益臻,张金文,林春梅,李媛媛. 中国中药杂志. 2014(20)
[7]NLRP6的研究进展[J]. 温哲,唐朝晖. 中华临床医师杂志(电子版). 2014(15)
[8]细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1基因表达的影响[J]. 杜文佳,汪玉良,党跃修,雷栓虎,黄良增,汪静,马靖琳,安丽萍. 中国康复理论与实践. 2014(07)
[9]Toll样受体（TLR）介导的天然免疫间的相互调节[J]. 于莉莉,韩代书. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[10]p38丝裂原活化蛋白激酶的功能与调控机制[J]. 庄秋宇,刘俊,韩家淮. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
博士论文
[1]A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期通过TLR4/MyD88直接途径诱导SOCS-1高表达的机制研究[D]. 吴景华.河北医科大学 2014
[2]小鼠播散性巨细胞病毒感染的免疫应答和致病机制研究 1)小鼠脾巨噬细胞DNA感受器AIM2识别MCMV DNA激活其炎性体通路的整体研究 2)Th17细胞在急性播散性MCMV感染致病机制中的作用[D]. 李旭芳.华中科技大学 2012
硕士论文
[1]牛多杀性巴氏杆菌A型、B型二价灭活疫苗的研究[D]. 汪漫.华中农业大学 2013
[2]TLR诱导NF-κB活化上调NLRP3表达的机制研究[D]. 乔羽.山东大学 2012
[3]NLRP3炎症复合体信号通路分子在幽门螺杆菌感染小鼠模型中表达的研究[D]. 蒋建烨.南华大学 2012
[4]TNF-α、IL-1β基因多态性和相关影响因素与军团菌感染关系的研究[D]. 智霞萍.山西医科大学 2009
本文编号：3588701
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 牛多杀性巴氏杆菌概述
1.1.1 牛多杀性巴氏杆菌病
1.1.2 牛多杀性巴氏杆菌致病机制
1.2 炎症机制
1.2.1 炎症反应
1.2.2 炎症反应的重要核心–IL-1β
1.2.3 TNF-α
1.2.4 炎性小体
1.3 NF-κB信号通路与炎症反应
1.4 MAPK信号通路与炎症反应
1.4.1 JNK信号通路
1.4.2 P38信号通路
1.5 Toll样受体与炎症反应
1.5.1 TLR2
1.5.2 TLR4
1.6 细胞吞噬作用对炎症信号通路的影响
第二章 引言
2.1 研究目的及意义
2.2 研究的主要内容
2.2.1 Pm A、Pm B诱导细胞的炎症反应
2.2.2 Pm A、Pm B诱导细胞炎症反应与Toll样受体的关系
2.2.3 Pm A、Pm B诱导细胞炎症与NF-κB、MAPK信号通路关系
2.2.4 Pm A、Pm B诱导细胞炎症反应与炎性小体的关系
2.2.5 NF-κB、MAPK信号通路与炎性小体
2.2.6 细胞吞噬作用与Pm A、Pm B诱导炎症信号通路的激活
2.3 技术路线
第三章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 细胞
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器
3.2 方法
3.2.1 Pm A、Pm B的培养及PCR鉴定
3.2.2 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的培养
3.2.3 样本的制备
3.2.4 提取小鼠巨噬细胞RAW264.7 总RNA
3.2.5 c DNA的合成
3.2.6 SYBR Green I实时定量PCR
3.2.7 ELISA的检测
3.2.8 Western Blot检测目的蛋白在巨噬细胞中的表达
3.2.9 数据分析
第四章 结果与分析
4.1 Pm A、Pm B的培养及PCR鉴定
4.2 q RT-PCR扩增曲线和熔解曲线
4.3 Pm A、Pm B诱导炎症反应
4.4 TLR2、TLR4介导炎症信号通路的激活
4.5 NF-κB、MAPK信号通路参与炎症信号通路的激活
4.6 炎性小体参与Pm A、Pm B诱导的炎症信号通路
4.6.1 炎性小体接头蛋白ASC的激活
4.6.2 Pm A、Pm B诱导炎症信号通路的激活依赖于Caspase-1
4.6.3 NLRP3、NLRP6参与Pm A、Pm B诱导的炎症反应
4.7 NF-κB、MAPK信号通路参与调控NLRP3、NLRP6炎性小体
4.8 细胞吞噬作用参与炎症信号通路的激活
第五章 讨论与结论
5.1 讨论
5.2 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]炎性小体在脂多糖诱导小鼠巨噬细胞中的表达及大黄素干预作用[J]. 孙晓琦,方南元,薛博瑜. 中华中医药杂志. 2015(10)
[2]IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平[J]. 金国玺,张燕,毕娅欣,于磊. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(09)
[3]牛多杀性巴氏杆菌疫苗研究进展[J]. 谢倩茹,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国奶牛. 2015(15)
[4]血必净注射液对缺氧/复氧大鼠心肌TLR4—NF-κB—TNF-α通路的影响[J]. 刘亚坤,何金波,陈海娥,陈丹,苗亚飞,应磊,游昕,王万铁. 中国中西医结合杂志. 2014(12)
[5]Role of NLRP3 and NLRP1 inflammasomes signaling pathways in pathogenesis of rheumatoid arthritis[J]. Tao Wang,Chang-Liang Zhu,Shuai Wang,Li-Wen Mo,Guo-Dong Yang,Jun Hu,Fan Zhang. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2014(10)
[6]疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究[J]. 龚享文,杨钦河,闫海震,张玉佩,梁荫基,刘益臻,张金文,林春梅,李媛媛. 中国中药杂志. 2014(20)
[7]NLRP6的研究进展[J]. 温哲,唐朝晖. 中华临床医师杂志(电子版). 2014(15)
[8]细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1基因表达的影响[J]. 杜文佳,汪玉良,党跃修,雷栓虎,黄良增,汪静,马靖琳,安丽萍. 中国康复理论与实践. 2014(07)
[9]Toll样受体（TLR）介导的天然免疫间的相互调节[J]. 于莉莉,韩代书. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[10]p38丝裂原活化蛋白激酶的功能与调控机制[J]. 庄秋宇,刘俊,韩家淮. 中国细胞生物学学报. 2013(02)
博士论文
[1]A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期通过TLR4/MyD88直接途径诱导SOCS-1高表达的机制研究[D]. 吴景华.河北医科大学 2014
[2]小鼠播散性巨细胞病毒感染的免疫应答和致病机制研究 1)小鼠脾巨噬细胞DNA感受器AIM2识别MCMV DNA激活其炎性体通路的整体研究 2)Th17细胞在急性播散性MCMV感染致病机制中的作用[D]. 李旭芳.华中科技大学 2012
硕士论文
[1]牛多杀性巴氏杆菌A型、B型二价灭活疫苗的研究[D]. 汪漫.华中农业大学 2013
[2]TLR诱导NF-κB活化上调NLRP3表达的机制研究[D]. 乔羽.山东大学 2012
[3]NLRP3炎症复合体信号通路分子在幽门螺杆菌感染小鼠模型中表达的研究[D]. 蒋建烨.南华大学 2012
[4]TNF-α、IL-1β基因多态性和相关影响因素与军团菌感染关系的研究[D]. 智霞萍.山西医科大学 2009
本文编号：3588701
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