猪流感病毒（H3N2）NP蛋白纳米抗体的制备及阻断ELISA方法的建立与评价
发布时间：2022-01-14 18:35
猪流感是一种由猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的猪的急性呼吸道疾病,其主要临床特征是发热、嗜睡、厌食症和鼻塞,给养猪业带来了巨大的经济损失。猪流感病毒主要包括H1N1,H1N2和H3N2三个亚型。猪一旦感染,会迅速发病,且常与其他呼吸道病原体混合感染。目前,猪流感血清学诊断方法主要包括血凝抑制试验和ELISA,虽然血凝抑制试验是猪流感血清学诊断的标准方法,但该方法结果的判定存在主观性,而且不适宜大规模样品的检测。传统ELISA方法主要是基于多克隆抗体和单克隆抗体而建立的,但单克隆抗体的制备费时费力,且生产成本高,多克隆抗体存在特异性低的问题。纳米抗体具有分子量小、稳定性好、高亲和力、高特异性和易于基因工程改造等优势,并且可通过不同的表达系统获得,是一种良好的诊断和治疗工具。本研究应用原核表达系统表达SIV高度保守的核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein,NP）,并通过噬菌体展示技术筛选NP蛋白特异性纳米抗体,纳米抗体与生物素受体肽融合表达和纯化后,通过生物素受体肽与生物素的结合标记生物素,用生物素化的纳米抗体作为阻断抗体,建立了一种特异...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甲型流感病毒（IAV）结构(Deemetal.2009)
2 常规抗体重链抗体及纳米抗体的结构示意图（引自(Cui et al. 20l Diagram of conventional Antibody, heavy chain Antibody and nanofrom (Cui et al. 2018))体的结构特征的序列的变异性主要集中在三个高变区，这些区域被regoin，FR）所包围, 折叠的 V 域包含 9 个 β 链(A-B-C-C酸和 94 位半胱氨酸之间形成一个保守的二硫键连接，，在此体系结构中，HV 区域分别位于连接 B-C、C'-C"和构中，并且在结构域的 N 端形成一个连续的表面，它的名称是互补决定区(Complementarity-determining regio，其他环状结构的长度的变化是有限的。在人类或老鼠型环状结构，连环结构组合的数量也十分有限。因此，环酸残基的存在可预测到它的实际结构(Chothia et al. 1992)。区环状结构和轻链可变区的三个环状结构并置，总的来说
较长的 HV1 环状结构是由于其起源于生殖细胞系基因组后与 VHH 结构域的功能选择有关，变长的环状结构相反的，因此需要二硫键来维持较长环状结构的稳定在 H1 和 H3 环状结构中包含一对额外的 Cys 残基，它没有抗原的情况下，明显限制了环的灵活性(Conrath et VHHs 中，H3 和 FR2 位置之间也存在二硫键。尽管 点 30、32 或 33(FR2 中的位置 50 或 H2 中的位置 55 H3 循环的 N 端、中部或 C 端的所有的可能位置，在具一种特殊的构象，称为拉伸扭转，使环的底部被扭曲 环中，屏蔽了 Phe42 与水的接触，并且由 Trp118(FR47 形成的芳香核稳定了 H3 环的构象，VHH 结构域的长的平行面，这使得它非常适合插入抗原表面的空腔中原决定簇实际的作用面(Jochen et al. 2012)。较长的 H3构，然而，这似乎是一种特例，大多数 Nbs 结构中的成平坦的抗原决定簇接触面。
【参考文献】：
期刊论文
[1]骆驼来源的纳米抗体人源化研究进展[J]. 赵明军,刘煜. 药物生物技术. 2018(03)
[2]包涵体蛋白复性的研究进展[J]. 付明娟,林接玉,谢捷明. 医学综述. 2015(20)
[3]猪流感病毒检测技术研究进展[J]. 文英会,刘占通,辛婷. 郑州牧业工程高等专科学校学报. 2011(02)
[4]A型猪流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 欧阳振宇,唐连飞,朱中武,肖家勇,孟芳,黄萍,吴愈柏. 中国畜牧兽医. 2010(09)
[5]分子生物学技术在猪流感诊断中的应用[J]. 谢金文,苗立中,沈志强. 吉林农业科学. 2010(03)
[6]分子伴侣与蛋白质折叠[J]. 井明艳,孙建义. 科技通报. 2004(05)
[7]生物素—链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用[J]. 屈霞琴,姜文琴,钱琴,应贤平,潘振业,陈天培. 上海实验动物科学. 1996(Z1)
博士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9蛋白纳米抗体的筛选及其抗病毒功能研究[D]. 刘红亮.西北农林科技大学 2016
本文编号：3589003
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甲型流感病毒（IAV）结构(Deemetal.2009)
2 常规抗体重链抗体及纳米抗体的结构示意图（引自(Cui et al. 20l Diagram of conventional Antibody, heavy chain Antibody and nanofrom (Cui et al. 2018))体的结构特征的序列的变异性主要集中在三个高变区，这些区域被regoin，FR）所包围, 折叠的 V 域包含 9 个 β 链(A-B-C-C酸和 94 位半胱氨酸之间形成一个保守的二硫键连接，，在此体系结构中，HV 区域分别位于连接 B-C、C'-C"和构中，并且在结构域的 N 端形成一个连续的表面，它的名称是互补决定区(Complementarity-determining regio，其他环状结构的长度的变化是有限的。在人类或老鼠型环状结构，连环结构组合的数量也十分有限。因此，环酸残基的存在可预测到它的实际结构(Chothia et al. 1992)。区环状结构和轻链可变区的三个环状结构并置，总的来说
较长的 HV1 环状结构是由于其起源于生殖细胞系基因组后与 VHH 结构域的功能选择有关，变长的环状结构相反的，因此需要二硫键来维持较长环状结构的稳定在 H1 和 H3 环状结构中包含一对额外的 Cys 残基，它没有抗原的情况下，明显限制了环的灵活性(Conrath et VHHs 中，H3 和 FR2 位置之间也存在二硫键。尽管 点 30、32 或 33(FR2 中的位置 50 或 H2 中的位置 55 H3 循环的 N 端、中部或 C 端的所有的可能位置，在具一种特殊的构象，称为拉伸扭转，使环的底部被扭曲 环中，屏蔽了 Phe42 与水的接触，并且由 Trp118(FR47 形成的芳香核稳定了 H3 环的构象，VHH 结构域的长的平行面，这使得它非常适合插入抗原表面的空腔中原决定簇实际的作用面(Jochen et al. 2012)。较长的 H3构，然而，这似乎是一种特例，大多数 Nbs 结构中的成平坦的抗原决定簇接触面。
【参考文献】：
期刊论文
[1]骆驼来源的纳米抗体人源化研究进展[J]. 赵明军,刘煜. 药物生物技术. 2018(03)
[2]包涵体蛋白复性的研究进展[J]. 付明娟,林接玉,谢捷明. 医学综述. 2015(20)
[3]猪流感病毒检测技术研究进展[J]. 文英会,刘占通,辛婷. 郑州牧业工程高等专科学校学报. 2011(02)
[4]A型猪流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 欧阳振宇,唐连飞,朱中武,肖家勇,孟芳,黄萍,吴愈柏. 中国畜牧兽医. 2010(09)
[5]分子生物学技术在猪流感诊断中的应用[J]. 谢金文,苗立中,沈志强. 吉林农业科学. 2010(03)
[6]分子伴侣与蛋白质折叠[J]. 井明艳,孙建义. 科技通报. 2004(05)
[7]生物素—链霉亲和素系统在检测MHV抗体中的应用[J]. 屈霞琴,姜文琴,钱琴,应贤平,潘振业,陈天培. 上海实验动物科学. 1996(Z1)
博士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9蛋白纳米抗体的筛选及其抗病毒功能研究[D]. 刘红亮.西北农林科技大学 2016
本文编号：3589003
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