circRNA3669作为ceRNA调控奶山羊子宫内膜上皮细胞凋亡的分子机理研究
发布时间：2022-01-16 12:05
环状RNA（circRNA）是一类内源性非编码RNA,具有ceRNA（竞争性内源RNA）功能。本课题组前期研究表明miR-26a促进奶山羊子宫内膜上皮细胞（EEC）增殖,但其具体的分子调控机制尚不清楚。本研究根据实验室前期构建的circRNA文库发现circRNA3669在奶山羊容受前期子宫内膜组织中特异性表达,且生物信息学预测发现,circRNA3669可作为ceRNA与miR-26a结合。因此,本研究推测circRNA3669可作为ceRNA通过miR-26a调控相关靶基因的表达,进而调控EEC增殖和凋亡。本试验以EEC为研究对象,通过干扰和过表达策略,利用stem-loop RT-qPCR、RT-qPCR、双荧光素酶活性检测系统、免疫组化、Western blot、CCK-8、EdU、细胞凋亡等检测技术,研究EEC中circRNA3669、miR-26a和RCN2之间的调控关系,以及circRNA3669和RCN2对EEC的调控作用,及其对MAPK信号通路和BCL2、BAX、Caspase3等相关凋亡蛋白的影响。主要研究结果如下:1.circRNA3669可作为ceRNA吸附mi...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
circRNA的生物发生机制Figure1-1biogeneticmechanismofcircRNAcircRNA生物发生的调控规则是相互依赖的，顺式调控元件和反式作用因子控制circRNA的剪接过程(Ling-LingandLi,2015)
包括细胞因子、转录因子和受体，或一个基因可能是许多不同 miRNA 的靶基因(Axtell and Meyers, 2018)。迄今为止，有70到100个特定的靶基因被证实为几个miRNA的靶点(Fan et al., 2019)。图 1-3 miRNA 作用机制图Figure 1-3 Schematic representation of microRNA mechanism of action1.4.2 miRNA 对细胞功能的调控作用一个 miRNA 可以靶向调控多个靶基因(Lee et al., 2008; Stappert et al., 2015)，多个miRNA 也能靶向调控同一个靶基因(Achache and Revel, 2006)。一些 miRNA 通过抑制靶基因的表达，产生对细胞功能较大的调控作用(Coppola et al., 2010)。因此，miRNA 可能与转录因子一样在调控动物细胞功能的过程中发挥着潜在的作用(Hobert, 2008)。研究表明 miR-205 可以通过识别血管内皮生长因子（VEGF）的 3′UTR 区域，直接影响 VEGF 的表达(Jude et al., 2012)。包括子宫内膜在内的许多组织血管的正常发育需要维持 VEGF 表达水平的平衡(Cakmak et al., 2017)。越来越多的证据表明，不同类型细胞释放的外泌体或微小囊泡中含有 miRNA，这为细胞间的通讯提供了一种替代模式(Chi et al., 2009)。例如 miR-125b 在猪的子宫中高
第二章 circRNA3669 通过吸附 miR-26a 抑制奶山羊子宫内膜上皮细胞凋亡2.3 结果与分析2.3.1 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的差异性表达本研究根据实验室前期构建的参与奶山羊子宫内膜容受期形成的 circRNA 文库，使用生物信息学预测，并筛选出与 miR-26a 有靶向调控作用，且表达量高、差异倍数大的关键 circRNA3669。为验证 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的差异性表达，通过 RT-qPCR 检测 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的表达量。检测结果显示在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期相比 circRNA3669 的表达量极显著下调（P<0.01，图 2-1）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-204在细胞增殖分化中的作用及其机制研究进展[J]. 唐琦,金云云,高佳阳,鱼婷,杨韩,雷初朝,蓝贤勇,陈宏. 中国牛业科学. 2018(02)
[2]环状RNA的分子特征、作用机制及生物学功能[J]. 周凤燕,杨青,朱熙春,蓝贤勇,陈宏. 农业生物技术学报. 2017(03)
[3]ciRS-7/miR-7轴调控肿瘤生长转移的研究进展[J]. 刘彦,周超,杨永学. 中国普通外科杂志. 2015(07)
[4]内质网上的蛋白质RCN2与STIM1-Orai1复合体相互作用（英文）[J]. 占艺,高尚邦,薛鹏,阳小飞,李正正,徐涛. 生物化学与生物物理进展. 2008(11)
[5]Oridonin induces apoptosis of HeLa cells via altering expression of Bcl-2/Bax and activating caspase-3/ICAD pathway[J]. Shin-ichi TASHIRO,Satoshi ONODERA,Takashi IKEJIMA. Acta Pharmacologica Sinica. 2004(05)
本文编号：3592625
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
circRNA的生物发生机制Figure1-1biogeneticmechanismofcircRNAcircRNA生物发生的调控规则是相互依赖的，顺式调控元件和反式作用因子控制circRNA的剪接过程(Ling-LingandLi,2015)
包括细胞因子、转录因子和受体，或一个基因可能是许多不同 miRNA 的靶基因(Axtell and Meyers, 2018)。迄今为止，有70到100个特定的靶基因被证实为几个miRNA的靶点(Fan et al., 2019)。图 1-3 miRNA 作用机制图Figure 1-3 Schematic representation of microRNA mechanism of action1.4.2 miRNA 对细胞功能的调控作用一个 miRNA 可以靶向调控多个靶基因(Lee et al., 2008; Stappert et al., 2015)，多个miRNA 也能靶向调控同一个靶基因(Achache and Revel, 2006)。一些 miRNA 通过抑制靶基因的表达，产生对细胞功能较大的调控作用(Coppola et al., 2010)。因此，miRNA 可能与转录因子一样在调控动物细胞功能的过程中发挥着潜在的作用(Hobert, 2008)。研究表明 miR-205 可以通过识别血管内皮生长因子（VEGF）的 3′UTR 区域，直接影响 VEGF 的表达(Jude et al., 2012)。包括子宫内膜在内的许多组织血管的正常发育需要维持 VEGF 表达水平的平衡(Cakmak et al., 2017)。越来越多的证据表明，不同类型细胞释放的外泌体或微小囊泡中含有 miRNA，这为细胞间的通讯提供了一种替代模式(Chi et al., 2009)。例如 miR-125b 在猪的子宫中高
第二章 circRNA3669 通过吸附 miR-26a 抑制奶山羊子宫内膜上皮细胞凋亡2.3 结果与分析2.3.1 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的差异性表达本研究根据实验室前期构建的参与奶山羊子宫内膜容受期形成的 circRNA 文库，使用生物信息学预测，并筛选出与 miR-26a 有靶向调控作用，且表达量高、差异倍数大的关键 circRNA3669。为验证 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的差异性表达，通过 RT-qPCR 检测 circRNA3669 在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期的表达量。检测结果显示在奶山羊子宫内膜容受期与容受前期相比 circRNA3669 的表达量极显著下调（P<0.01，图 2-1）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-204在细胞增殖分化中的作用及其机制研究进展[J]. 唐琦,金云云,高佳阳,鱼婷,杨韩,雷初朝,蓝贤勇,陈宏. 中国牛业科学. 2018(02)
[2]环状RNA的分子特征、作用机制及生物学功能[J]. 周凤燕,杨青,朱熙春,蓝贤勇,陈宏. 农业生物技术学报. 2017(03)
[3]ciRS-7/miR-7轴调控肿瘤生长转移的研究进展[J]. 刘彦,周超,杨永学. 中国普通外科杂志. 2015(07)
[4]内质网上的蛋白质RCN2与STIM1-Orai1复合体相互作用（英文）[J]. 占艺,高尚邦,薛鹏,阳小飞,李正正,徐涛. 生物化学与生物物理进展. 2008(11)
[5]Oridonin induces apoptosis of HeLa cells via altering expression of Bcl-2/Bax and activating caspase-3/ICAD pathway[J]. Shin-ichi TASHIRO,Satoshi ONODERA,Takashi IKEJIMA. Acta Pharmacologica Sinica. 2004(05)
本文编号：3592625
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