DAZL基因对犊牛支持细胞几种精子发生相关基因表达的影响
发布时间：2022-01-18 20:48
睾丸支持细胞（sertoli cell）被认为是生精细胞的支架细胞，能够为生精细胞提供必需的营养物质，并且合成和分泌雄激素结合蛋白，为生精细胞提供高浓度的雄激素环境，对精子发生发挥着重要的作用。因此，研究睾丸支持细胞的体外培养与生物学特性，不仅对支持细胞潜在的功能研究提供基础，而且对雄性不育、器官移植以及转基因动物生产等问题的解决开辟了广阔的前景。本研究首先利用组合酶消化法分离出犊牛睾丸支持细胞，并采用差速贴壁法对支持细胞进行纯化，进一步通过免疫细胞化学和分子标记检测技术对支持细胞纯度进行了鉴定；对不同血清浓度条件下支持细胞的培养特性进行了分析；此外，本研究采用MTT提取比色方法对支持细胞的体外增殖特性进行了分析比较；通过克隆扩增出牛DAZL基因并构建其真核表达载体pEGFP-N3-DAZL，采用脂质体介导使其转染至睾丸支持细胞，利用Real-time PCR技术检测支持细胞中过表达DAZL后精子发生相关基因的表达变化，并通过G418筛选稳定过表达DAZL的细胞株。本研究为阐明支持细胞的体外培养特性及生物学应用前景奠定基础，主要研究结果如下：（1）利用组合酶法可以对犊牛睾丸支持细胞进行...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
睾丸组织结构
逐渐形成精子尾部，线粒体成为精子尾部中段的线粒体鞘膜，细胞质则大部分脱落，仅由极少量的细胞质被保留在精子中。图1-2 精子发生示意图Fig. 1-2 Spermatogenesis schematic models1.2.3 支持细胞对精子发生的影响1.2.3.1 支持细胞的发育和成熟支持细胞也需要经历发育成熟的过程。处于青春期前的动物支持细胞属于未成熟型，未成熟型的支持细胞有三种类型，Sf、Sa 和 Sb 型。处于胚胎型的支持细胞我们将之称为 Sf 型，并于出生后 2w 转化为 Sa 型。在 1 岁左右，Sa 型进一步转化为 Sb 型。当机体发育至青春期，Sb 型支持细胞又转化为成熟型（Sc）。研究表明，Sf、Sa 和 Sb 型支持细胞的吞噬能力都很强而且能够抑制精原细胞的减数分裂。动物经过青春期，支持细胞经过一系列形态结构变化至 Sc 型
[26]。图1-3 牛睾丸组织切片Fig. 1-3 Histological section through testicular parenchyma of a bull1：管腔；2：精细胞；3：精母细胞；4：精原细胞；5：支持细胞；6：成肌纤维细胞；7：间质细胞；8：微血管1: Lumen of Tubulus seminiferus contortus; 2: Spermatids; 3: Spermatocytes; 4: Spermatogonia; 5:Sertoli cell; 6: Myofibroblasts; 7: Leydig cells; 8: capillaries支持细胞分泌的抑制素（Inhibin）可以从支持细胞顶部进入曲细精管管腔，然后汇入睾丸网并吸收入血；也可从基底部进入间质后吸收入血。但成熟睾丸中 96%的抑制素是分泌入管腔的，可能与成熟睾丸的 BTB 日趋完善有关。临床上利用 Inhibin 抑制生育，但不影响生6
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织Dazl基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 付永,魏雅萍,孟茹,吴克选,陈生梅,张立成,王谢忠. 西北农业学报. 2013(01)
[2]新生牛睾丸支持细胞的体外培养及鉴定分析[J]. 于磊,郑鹏,荣恩光,于娜,田亚光,张贵学. 吉林农业大学学报. 2013(01)
[3]山羊DAZL基因的克隆及在山羊骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 张艳丽,钟部帅,樊懿萱,周峥嵘,王子玉,应诗家,郭蓉,王锋. 南京农业大学学报. 2012(06)
[4]睾丸sertoli细胞免疫抑制及营养作用的研究进展[J]. 辛民志,宋纯,段秀庆. 医学研究杂志. 2012(09)
[5]犊牛睾丸支持细胞的分离与冷冻保存[J]. 孙秀娟. 中国草食动物科学. 2012(04)
[6]睾丸支持细胞功能的研究进展[J]. 刘民,罗兰. 实验动物科学. 2012(01)
[7]睾丸支持细胞的生物学特性及研究进展[J]. 余晓晖,胡云飞. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(44)
[8]牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达[J]. 汤展毅,严云勤,高学军,陆黎敏,朱丹丹,冀志庚. 中国农业科学. 2010(13)
[9]牦牛DAZL基因编码区的克隆和序列特征与进化分析[J]. 李新福,谢元澄,张庆波,赵兴波,顾垚,朱翔,谢庄,李齐发. 南京农业大学学报. 2010(03)
[10]牛精子发生相关新基因b-DAZL的克隆、生物信息学分析与组织表达研究[J]. 张庆波,李齐发,李家璜,李新福,刘振山,潘增祥,宋大伟,谢庄. 自然科学进展. 2008(05)
博士论文
[1]Desert Hedgehog诱导大鼠胚胎中脑神经前体细胞定向分化的研究[D]. 杨彩侠.河北医科大学 2009
本文编号：3595565
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
睾丸组织结构
逐渐形成精子尾部，线粒体成为精子尾部中段的线粒体鞘膜，细胞质则大部分脱落，仅由极少量的细胞质被保留在精子中。图1-2 精子发生示意图Fig. 1-2 Spermatogenesis schematic models1.2.3 支持细胞对精子发生的影响1.2.3.1 支持细胞的发育和成熟支持细胞也需要经历发育成熟的过程。处于青春期前的动物支持细胞属于未成熟型，未成熟型的支持细胞有三种类型，Sf、Sa 和 Sb 型。处于胚胎型的支持细胞我们将之称为 Sf 型，并于出生后 2w 转化为 Sa 型。在 1 岁左右，Sa 型进一步转化为 Sb 型。当机体发育至青春期，Sb 型支持细胞又转化为成熟型（Sc）。研究表明，Sf、Sa 和 Sb 型支持细胞的吞噬能力都很强而且能够抑制精原细胞的减数分裂。动物经过青春期，支持细胞经过一系列形态结构变化至 Sc 型
[26]。图1-3 牛睾丸组织切片Fig. 1-3 Histological section through testicular parenchyma of a bull1：管腔；2：精细胞；3：精母细胞；4：精原细胞；5：支持细胞；6：成肌纤维细胞；7：间质细胞；8：微血管1: Lumen of Tubulus seminiferus contortus; 2: Spermatids; 3: Spermatocytes; 4: Spermatogonia; 5:Sertoli cell; 6: Myofibroblasts; 7: Leydig cells; 8: capillaries支持细胞分泌的抑制素（Inhibin）可以从支持细胞顶部进入曲细精管管腔，然后汇入睾丸网并吸收入血；也可从基底部进入间质后吸收入血。但成熟睾丸中 96%的抑制素是分泌入管腔的，可能与成熟睾丸的 BTB 日趋完善有关。临床上利用 Inhibin 抑制生育，但不影响生6
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织Dazl基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 付永,魏雅萍,孟茹,吴克选,陈生梅,张立成,王谢忠. 西北农业学报. 2013(01)
[2]新生牛睾丸支持细胞的体外培养及鉴定分析[J]. 于磊,郑鹏,荣恩光,于娜,田亚光,张贵学. 吉林农业大学学报. 2013(01)
[3]山羊DAZL基因的克隆及在山羊骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 张艳丽,钟部帅,樊懿萱,周峥嵘,王子玉,应诗家,郭蓉,王锋. 南京农业大学学报. 2012(06)
[4]睾丸sertoli细胞免疫抑制及营养作用的研究进展[J]. 辛民志,宋纯,段秀庆. 医学研究杂志. 2012(09)
[5]犊牛睾丸支持细胞的分离与冷冻保存[J]. 孙秀娟. 中国草食动物科学. 2012(04)
[6]睾丸支持细胞功能的研究进展[J]. 刘民,罗兰. 实验动物科学. 2012(01)
[7]睾丸支持细胞的生物学特性及研究进展[J]. 余晓晖,胡云飞. 中国组织工程研究与临床康复. 2010(44)
[8]牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达[J]. 汤展毅,严云勤,高学军,陆黎敏,朱丹丹,冀志庚. 中国农业科学. 2010(13)
[9]牦牛DAZL基因编码区的克隆和序列特征与进化分析[J]. 李新福,谢元澄,张庆波,赵兴波,顾垚,朱翔,谢庄,李齐发. 南京农业大学学报. 2010(03)
[10]牛精子发生相关新基因b-DAZL的克隆、生物信息学分析与组织表达研究[J]. 张庆波,李齐发,李家璜,李新福,刘振山,潘增祥,宋大伟,谢庄. 自然科学进展. 2008(05)
博士论文
[1]Desert Hedgehog诱导大鼠胚胎中脑神经前体细胞定向分化的研究[D]. 杨彩侠.河北医科大学 2009
本文编号：3595565
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