JEV来源sRNA的鉴定与功能分析
发布时间：2022-01-20 14:41
乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）属于黄病毒科黄病毒属病毒,它能入侵中枢神经系统,造成神经炎症反应,导致人和动物发病甚至死亡,是一种危害严重的人兽共患病病原。sRNA（Small RNA）是一类长度上为约18-30nt的调控性RNA分子,主要包括微小RNA（miRNA）、干扰小RNA（siRNA）、核仁小RNA（snoRNA）、Piwi蛋白互作RNA（piRNA）等。sRNA几乎普遍存在于所有生命体中,并在细胞增殖、分化和凋亡、癌症以及病毒感染中起重要作用。但目前对乙型脑炎病毒sRNA的研究报道较少,病毒编码sRNA的功能及其在病毒与宿主相互联系中所起的作用尚不清楚,因此研究JEV来源的sRNA对深入理解其致病机制具有重要意义。本研究具体内容如下:通过RT-PCR和IFA鉴定,利用BHK-21和C6/36细胞从上海市嘉定区猪场蚊媒样品中成功分离出1株JEV,命名为JD-15株。该毒株源自中华按蚊,用JD-15株分别感染BHK-21和C6/36细胞,72h后所有细胞均发生明显病变,其病毒滴度为1.96×106 PFU/0....
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
JEV病毒粒子三维结构示意图(Wangetal.,2017)
图 1.2 JEV 3'端非编码区顺式作用元件示意图(Yun et al., 2009)Fig.1.2 Schematic representation of the JEV 3’NCR Cis-acting element.(Yun et al., 2009)1.2.3 乙型脑炎病毒的复制周期病毒的复制周期起始于与受体的相互作用，乙型脑炎上已发现许多分子受体，如牛乳铁蛋白能通过阻断分子受体硫酸乙酰肝素进而降低 BHK-21 细胞中 JEV 的入侵（Chien et al., 2008），而在 C6/36 细胞中热休克蛋白 70（HSP70）被鉴定为 JEV 的受体（Ren et al., 2007），因此在不同细胞环境下病毒可能与许多不同蛋白复合物互作而并非单一受体。病毒吸附后通过受体介导的内吞作用内化，被转运至早期内体。在内体中低 pH 值环境导致 E 蛋白构象发生变化，导致病毒膜与细胞膜之间发生膜融合，接着病毒脱壳其衣壳释放到细胞质中发生解离，然后病毒基因组释放（Bressanelli et al., 2004）。单链正义基因组 RNA 作为模板被翻译成一个多聚蛋白，该蛋白靶向内质网，并由多种蛋白酶加工形成结构蛋白和参与复制的非结构蛋白。非结构蛋白 NS3 和 NS5 与各种宿主因子一起构成病毒复制复合物，其中非结构蛋白 NS3 诱导内质网相关的膜网络的形成为复制提供场所，而具有RNA依赖的RNA聚合酶活性的NS5蛋白能催化复制（Brinton et al., 2002）。为了保证参与复制的病毒 RNA 分子是全长 RNA，病毒基因组会发生环化，这是一种由 5’NCR和 3’NCR 的反向互补性介导的长链 RNA 相互作用（Hahn et al.,1987）。正链 RNA 模板在病毒复
图 1.3 JEV 复制周期示意图（Fernandez-Garcia et al., 2009）Fig.1.3 Schematic representation of the JEV replication cycle（Fernandez-Garcia et al., 2009） 乙型脑炎病毒编码蛋白的功能C 蛋白大小在 13KDa 左右，是病毒的核衣壳蛋白，能包裹病毒 RNA，从而保护病毒核的结构与黄病毒属其他成员具有较高的相似性，尤其是西尼罗热病毒（West nile virus, kland et al., 2004）。该蛋白上有核定位信号，分布于 JEV 感染细胞的细胞质和细胞核 位甘氨酸或 43 位脯氨酸位点能减弱 JEV 对小鼠的致病性（Mori et al., 2005）。prM 蛋白是 M 蛋白的前体蛋白，在病毒粒子成熟过程中，prM 蛋白与 E 蛋白相互作聚体，接着 prM 蛋白被位于反式高尔基体的弗林蛋白酶或相关蛋白酶切割水解形成 M prM 蛋白 C 端的相邻跨膜结构域，能帮助自身进行膜定位，并协助 E 蛋白进行膜转运, 2011）。prM 蛋白作为 E 蛋白的分子伴侣能协助其折叠（Zai et al., 2013）。prM 蛋白的与病毒的释放有关，但具体机制尚不清楚（Kim et al., 2008）。E 蛋白分子量大小约 53KDa，同病毒的吸附、融合、血凝性、细胞嗜性和病毒毒力相中和抗体（Lin et al., 2003）。E 蛋白具有三个结构域，中心结构域 I（DI）、延伸结构I）和球状结构域 III（DIII）。DI 位于中间，由九链 β 桶组成，具有血凝活性及一些抗原
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA定量检测方法的研究进展[J]. 蓝琳,喻芬,黄明敏,孟祥贤. 生命科学研究. 2018(06)
[2]猪乙型脑炎病毒SCYA201201株感染小鼠后突破血脑屏障能力研究[J]. 柴春霞,王侨,赖雅兰,徐伊璇,文心田,曹三杰,黄小波,文翼平,赵勤,伍锐. 浙江农业学报. 2018(06)
[3]中华按蚊源日本脑炎病毒的分离鉴定及其分子特征的分析[J]. 刘茜倩,魏建超,钟登科,吴亚玲,石坤,张克龙,陆美林,肖长广,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,石元元,马志永,范红结. 中国兽医科学. 2017(01)
[4]传播动物虫媒病的蚊种分类及其在我国的分布[J]. 刘建利,花群俊,杨云庆,杨俊兴,祝贺,唐金明. 中国动物检疫. 2015(03)
[5]microRNA定量检测方法的研究进展[J]. 祝申蓉,吴旭日,陈依军. 中国药科大学学报. 2015(01)
[6]上海市蚊媒种类、分布及其病原[J]. 周正斌,吕山,张仪,顾文彪,郭云海,蒋明,张臣臣. 中国媒介生物学及控制杂志. 2015(01)
[7]基于茎环引物定量检测miRNA的研究进展[J]. 宋伟,万百惠,王静,董平,梁兴国. 食品工业科技. 2014(19)
[8]我国流行性乙型脑炎发病的聚类分析及其未来发病趋势预测[J]. 刘洁,何钦成. 中国媒介生物学及控制杂志. 2013(02)
[9]Identification of circulating miRNA biomarkers based on global quantitative real-time PCR profiling[J]. Kang Kang 1,2 , Xiao Peng 1 , Jun Luo 2 and Deming Gou 11 College of Life Science, Shenzhen University, Shenzhen, Guangdong, 518060, China. 2 College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi, 712100, China.. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2012(02)
[10]流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况[J]. 邓绪芳,史子学,邱亚峰,沈阳,邵东华,马志永. 动物医学进展. 2011(02)
博士论文
[1]JE疫苗突变株生物学特性及鸭坦布苏病毒流行株基因特征研究[D]. 王经满.南京农业大学 2015
硕士论文
[1]河南省乙型脑炎病毒的分离鉴定及分子特性分析[D]. 杨猛.河南农业大学 2011
本文编号：3599006
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
JEV病毒粒子三维结构示意图(Wangetal.,2017)
图 1.2 JEV 3'端非编码区顺式作用元件示意图(Yun et al., 2009)Fig.1.2 Schematic representation of the JEV 3’NCR Cis-acting element.(Yun et al., 2009)1.2.3 乙型脑炎病毒的复制周期病毒的复制周期起始于与受体的相互作用，乙型脑炎上已发现许多分子受体，如牛乳铁蛋白能通过阻断分子受体硫酸乙酰肝素进而降低 BHK-21 细胞中 JEV 的入侵（Chien et al., 2008），而在 C6/36 细胞中热休克蛋白 70（HSP70）被鉴定为 JEV 的受体（Ren et al., 2007），因此在不同细胞环境下病毒可能与许多不同蛋白复合物互作而并非单一受体。病毒吸附后通过受体介导的内吞作用内化，被转运至早期内体。在内体中低 pH 值环境导致 E 蛋白构象发生变化，导致病毒膜与细胞膜之间发生膜融合，接着病毒脱壳其衣壳释放到细胞质中发生解离，然后病毒基因组释放（Bressanelli et al., 2004）。单链正义基因组 RNA 作为模板被翻译成一个多聚蛋白，该蛋白靶向内质网，并由多种蛋白酶加工形成结构蛋白和参与复制的非结构蛋白。非结构蛋白 NS3 和 NS5 与各种宿主因子一起构成病毒复制复合物，其中非结构蛋白 NS3 诱导内质网相关的膜网络的形成为复制提供场所，而具有RNA依赖的RNA聚合酶活性的NS5蛋白能催化复制（Brinton et al., 2002）。为了保证参与复制的病毒 RNA 分子是全长 RNA，病毒基因组会发生环化，这是一种由 5’NCR和 3’NCR 的反向互补性介导的长链 RNA 相互作用（Hahn et al.,1987）。正链 RNA 模板在病毒复
图 1.3 JEV 复制周期示意图（Fernandez-Garcia et al., 2009）Fig.1.3 Schematic representation of the JEV replication cycle（Fernandez-Garcia et al., 2009） 乙型脑炎病毒编码蛋白的功能C 蛋白大小在 13KDa 左右，是病毒的核衣壳蛋白，能包裹病毒 RNA，从而保护病毒核的结构与黄病毒属其他成员具有较高的相似性，尤其是西尼罗热病毒（West nile virus, kland et al., 2004）。该蛋白上有核定位信号，分布于 JEV 感染细胞的细胞质和细胞核 位甘氨酸或 43 位脯氨酸位点能减弱 JEV 对小鼠的致病性（Mori et al., 2005）。prM 蛋白是 M 蛋白的前体蛋白，在病毒粒子成熟过程中，prM 蛋白与 E 蛋白相互作聚体，接着 prM 蛋白被位于反式高尔基体的弗林蛋白酶或相关蛋白酶切割水解形成 M prM 蛋白 C 端的相邻跨膜结构域，能帮助自身进行膜定位，并协助 E 蛋白进行膜转运, 2011）。prM 蛋白作为 E 蛋白的分子伴侣能协助其折叠（Zai et al., 2013）。prM 蛋白的与病毒的释放有关，但具体机制尚不清楚（Kim et al., 2008）。E 蛋白分子量大小约 53KDa，同病毒的吸附、融合、血凝性、细胞嗜性和病毒毒力相中和抗体（Lin et al., 2003）。E 蛋白具有三个结构域，中心结构域 I（DI）、延伸结构I）和球状结构域 III（DIII）。DI 位于中间，由九链 β 桶组成，具有血凝活性及一些抗原
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA定量检测方法的研究进展[J]. 蓝琳,喻芬,黄明敏,孟祥贤. 生命科学研究. 2018(06)
[2]猪乙型脑炎病毒SCYA201201株感染小鼠后突破血脑屏障能力研究[J]. 柴春霞,王侨,赖雅兰,徐伊璇,文心田,曹三杰,黄小波,文翼平,赵勤,伍锐. 浙江农业学报. 2018(06)
[3]中华按蚊源日本脑炎病毒的分离鉴定及其分子特征的分析[J]. 刘茜倩,魏建超,钟登科,吴亚玲,石坤,张克龙,陆美林,肖长广,李蓓蓓,刘珂,邵东华,邱亚峰,石元元,马志永,范红结. 中国兽医科学. 2017(01)
[4]传播动物虫媒病的蚊种分类及其在我国的分布[J]. 刘建利,花群俊,杨云庆,杨俊兴,祝贺,唐金明. 中国动物检疫. 2015(03)
[5]microRNA定量检测方法的研究进展[J]. 祝申蓉,吴旭日,陈依军. 中国药科大学学报. 2015(01)
[6]上海市蚊媒种类、分布及其病原[J]. 周正斌,吕山,张仪,顾文彪,郭云海,蒋明,张臣臣. 中国媒介生物学及控制杂志. 2015(01)
[7]基于茎环引物定量检测miRNA的研究进展[J]. 宋伟,万百惠,王静,董平,梁兴国. 食品工业科技. 2014(19)
[8]我国流行性乙型脑炎发病的聚类分析及其未来发病趋势预测[J]. 刘洁,何钦成. 中国媒介生物学及控制杂志. 2013(02)
[9]Identification of circulating miRNA biomarkers based on global quantitative real-time PCR profiling[J]. Kang Kang 1,2 , Xiao Peng 1 , Jun Luo 2 and Deming Gou 11 College of Life Science, Shenzhen University, Shenzhen, Guangdong, 518060, China. 2 College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling, Shaanxi, 712100, China.. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2012(02)
[10]流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况[J]. 邓绪芳,史子学,邱亚峰,沈阳,邵东华,马志永. 动物医学进展. 2011(02)
博士论文
[1]JE疫苗突变株生物学特性及鸭坦布苏病毒流行株基因特征研究[D]. 王经满.南京农业大学 2015
硕士论文
[1]河南省乙型脑炎病毒的分离鉴定及分子特性分析[D]. 杨猛.河南农业大学 2011
本文编号：3599006
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