基于Me-MLiverpool重组蛋白的新孢子虫胶体金免疫层析检测方法的建立

发布时间：2022-01-23 22:22

　　根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a（+）质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证。以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法（CGIA）。重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GIC... 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组蛋白Nc-livepoor的SDS-PAGE分析

Nc-livepoor重组蛋白Western blot的分析

表2 最佳SPA蛋白浓度的确定Table 2 Determination of optimum SPA protein concentration in colloidal gold solution 项目 Item SPA蛋白浓度/(mg·mL-1) SPA protein concentration 0 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 2.00 OD值 OD value 0.166 0.201 0.233 0.255 0.259 0.235 0.247 0.290 最佳蛋白浓度/(mg·mL-1) Optimal protein concentration 0.75图7 CGIA特异性试验

【参考文献】：
期刊论文
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[4]牛新孢子虫病在新疆地区流行情况调查[J]. 闫双,陈亮,巴音查汗.  黑龙江畜牧兽医. 2012(19)
[5]基于Nc-5基因的新孢子虫病PCR诊断方法的建立[J]. 柴方红,贾立军,张守发.  畜牧与兽医. 2011(12)

博士论文
[1]梅花鹿感染犬新孢子虫双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立及应用[D]. 田来明.吉林大学 2015

硕士论文
[1]犬新孢子虫检测方法的建立及应用[D]. 马文晨.吉林大学 2018
[2]新孢子虫病原分离鉴定及免疫化学检测方法的建立[D]. 王琪.吉林农业大学 2017



本文编号：3605265