长角血蜱Tm蛋白和MALC蛋白的免疫保护性初步分析
发布时间：2022-01-26 17:23
蜱（Tick）传播疾病病原能力世界第二，是最重要的人畜共患病传播媒介之，特别是森林脑炎、新疆出血热、莱姆病、Q热等人畜共患病，严重威胁着世界人类健康和畜牧业的发展。因此，蜱的安全、无污染、有效防治成为畜牧业生产中急待解决的问题，因此研发新的防控制剂成为必然趋势。目前以免疫学为基础的疫苗防控逐渐成为最有前景的防治蜱方法之，而这防治途径的关键在于蜱功能基因的鉴定。本研究对免疫学方法筛选文库得到的长角血蜱（Haemaphysalislongicornis）原肌球蛋白（HL-Tm）和肌球蛋白碱性轻链（HL-MALC）两个功能基因进行生物信息学分析，随后进行克隆和原核表达，分别采用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性。采用实时定量PCR技术分析其在长角血蜱п同发育阶段及п同组织中的分布，以及通过动物免疫及攻蜱试验和RNAi试验来评估其作为控蜱免疫疫苗候选抗原的可行性。为深入探索蜱生理功能调控机制、评估新型环境友好害虫防控制剂和抗蜱疫苗候选抗原奠定基础，补充我国在防控蜱新制剂研究和蜱生理行为干预方面的空白。本论文研究结果如н：将HL-MALC基因和HL-Tm基...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 蜱的概况
1.1.1 蜱虫形态特征
1.1.2 生长发育
1.2 传播疾病
1.2.1 森林脑炎
1.2.2 新疆出血热
1.2.3 莱姆病
1.2.4 Q 热
1.3 蜱肌肉的组成
1.3.1 肌球蛋白
1.3.1.1 肌球蛋白性质
1.3.1.2 肌球蛋白功能
1.3.2 原肌球蛋白
1.3.3 肌动蛋白
1.3.4 肌钙蛋白
1.4 蜱类肌肉相关蛋白的研究进展
1.4.1 长角血蜱的肌肉相关蛋白研究进展
1.4.2 青海血蜱的肌肉相关蛋白研究进展
1.4.3 扇头蜱肌肉相关蛋白的研究进展
1.5 其他节肢动物肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.1 甲壳纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.2 蛛形纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.3 多足纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.4 昆虫纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.6 本研究的目的及意义
第二章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的生物信息学分析
2.1 材料方法
2.1.1 生物信息学方法分析目的基因的全序列
2.2 结果
2.2.1 HL-Tm 基因全长的获得及生物信息学分析
2.2.2 HL-MALC 基因全长的获得及生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的原核表达及其反应原性初步鉴定
3.1 材料
3.1.1 蜱、实验动物
3.1.2 试剂
3.1.3 仪器设备
3.2 方法
3.2.1 引物设计
3.2.2 聚合酶链式反应
3.2.3 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的克隆以及测序
3.2.4 重组表达载体的构建和 PCR 鉴定
3.2.5 重组载体的原核表达
3.2.6 MagneGSTTM 小量纯化蛋白
3.2.7 Westernblot 检测
3.3 结果
3.3.1 长角血蜱基因 Tm 和 MALC 基因的 ORF 扩增结果
3.3.2 HL-Tm 和 HL-MALC 基因表达产物及纯化的重组蛋白质的 SDS-PAGE 分析
3.3.3 Western-blotting 分析表达产物
3.4 讨论
第四章 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在长角血蜱不同发育阶段和组织的转录
4.1 材料
4.1.1 蜱、组织收集、总 RNA 的提取和 cDNA 合成
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器设备
4.2 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在长角血蜱不同发育阶段和组织的转录
4.2.1 荧光相对定量 PCR 引物
4.2.2 相对定量分析目的基因在长角血蜱п同发育阶段和组织中的转录
4.3 结果
4.3.1 相对定量分析 HL-Tm 基因在п同组织、п同发育阶段的转录
4.3.2 相对定量分析 HL-MALC 基因在п同组织、п同发育阶段的转录
4.4 讨论
第五章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的动物免疫及攻蜱实验和 RNAi 实验
5.1 材料
5.1.1 蜱、组织收集、总 RNA 的提取和 cDNA 合成
5.1.2 试剂
5.1.3 仪器设备
5.2 方法
5.2.1 融合蛋白的大量纯化
5.2.2 蛋白免疫及攻蜱试验
5.2.3 RNAi 实验
5.2.3.1 Liner DNA template 的扩增
5.2.3.2 ds RNA 的制备
5.2.3.3 ds RNA 的显微注射
5.2.3.4 接种至兔体饲血
5.2.3.5 干扰效果分析
5.2.3.6 干扰后蜱的沉默效果
5.3 结果
5.3.1 rHL-Tm 免疫和攻蜱实验
5.3.2 rHL- MALC 免疫和攻蜱实验
5.3.3 RNAi 试验结果
5.3.3.1 dsRNA 的合成
5.3.3.2 RNA 干扰后目的基因的沉默效果评价
5.3.3.3 HL-Tm 沉默后对长角血蜱生物学特性的影响
5.3.3.4 HL-MALC 沉默后对长角血蜱生物学特性的影响
5.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简历
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]中秋蚕饲养管理技术[J]. 谢文革. 现代农业科技. 2013(04)
[2]浙江省蜱媒传染病监测研究[J]. 凌锋,龚震宇,柴程良,林君芬,孙继民,侯娟,吴海霞,刘起勇. 中国媒介生物学及控制杂志. 2013(01)
[3]蜱及蜱传病的研究进展[J]. 刘琪,王伟利,孟庆峰. 安徽农业科学. 2013(03)
[4]斑马鱼原肌球蛋白基因克隆表达及免疫学鉴定[J]. 李荔,陈樱麟,闫浩,刘志刚. 水产科学. 2013(01)
[5]甲状腺激素、肌钙蛋白Ⅰ和B型钠尿肽在急性冠状动脉综合征患者中的变化及预后评价[J]. 唐新,李永姝,贾克刚. 检验医学. 2012(12)
[6]莱姆病螺旋体优势抗原BmpA分子克隆、高效表达与亚细胞地位[J]. 宝福凯,赖名耀,文霞,董坚,柳爱华,陈明清. 中国病原生物学杂志. 2012(11)
[7]心力衰竭治疗前后心肌酶和肌钙蛋白T及C反应蛋白水平变化分析[J]. 葛晓丽. 中国全科医学. 2012(20)
[8]实验室条件下小亚璃眼蜱生活史观察[J]. 孙明,曾巧英,殷宏,关贵全,刘志杰,任巧云,罗建勋. 中国媒介生物学及控制杂志. 2011(04)
[9]长角血蜱新基因HL05全长序列的克隆与原核表达[J]. 张丽艳,刘光远,田占成,谢俊仁,龚真莉,刘建刚. 中国兽医科学. 2011(04)
[10]中国蜱传病主要流行趋势及防控科技对策[J]. 马广鹏,孙传范,赵娜,张西臣. 中国农业科技导报. 2011(02)
硕士论文
[1]动物蜱形态学鉴定核糖体及线粒体DNA多态性研究[D]. 马君.湖南农业大学 2011
本文编号：3610880
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 蜱的概况
1.1.1 蜱虫形态特征
1.1.2 生长发育
1.2 传播疾病
1.2.1 森林脑炎
1.2.2 新疆出血热
1.2.3 莱姆病
1.2.4 Q 热
1.3 蜱肌肉的组成
1.3.1 肌球蛋白
1.3.1.1 肌球蛋白性质
1.3.1.2 肌球蛋白功能
1.3.2 原肌球蛋白
1.3.3 肌动蛋白
1.3.4 肌钙蛋白
1.4 蜱类肌肉相关蛋白的研究进展
1.4.1 长角血蜱的肌肉相关蛋白研究进展
1.4.2 青海血蜱的肌肉相关蛋白研究进展
1.4.3 扇头蜱肌肉相关蛋白的研究进展
1.5 其他节肢动物肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.1 甲壳纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.2 蛛形纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.3 多足纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.5.4 昆虫纲肌肉相关蛋白的研究进展
1.6 本研究的目的及意义
第二章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的生物信息学分析
2.1 材料方法
2.1.1 生物信息学方法分析目的基因的全序列
2.2 结果
2.2.1 HL-Tm 基因全长的获得及生物信息学分析
2.2.2 HL-MALC 基因全长的获得及生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的原核表达及其反应原性初步鉴定
3.1 材料
3.1.1 蜱、实验动物
3.1.2 试剂
3.1.3 仪器设备
3.2 方法
3.2.1 引物设计
3.2.2 聚合酶链式反应
3.2.3 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的克隆以及测序
3.2.4 重组表达载体的构建和 PCR 鉴定
3.2.5 重组载体的原核表达
3.2.6 MagneGSTTM 小量纯化蛋白
3.2.7 Westernblot 检测
3.3 结果
3.3.1 长角血蜱基因 Tm 和 MALC 基因的 ORF 扩增结果
3.3.2 HL-Tm 和 HL-MALC 基因表达产物及纯化的重组蛋白质的 SDS-PAGE 分析
3.3.3 Western-blotting 分析表达产物
3.4 讨论
第四章 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在长角血蜱不同发育阶段和组织的转录
4.1 材料
4.1.1 蜱、组织收集、总 RNA 的提取和 cDNA 合成
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器设备
4.2 HL-Tm 基因和 HL-MALC 基因在长角血蜱不同发育阶段和组织的转录
4.2.1 荧光相对定量 PCR 引物
4.2.2 相对定量分析目的基因在长角血蜱п同发育阶段和组织中的转录
4.3 结果
4.3.1 相对定量分析 HL-Tm 基因在п同组织、п同发育阶段的转录
4.3.2 相对定量分析 HL-MALC 基因在п同组织、п同发育阶段的转录
4.4 讨论
第五章 HL-Tm 和 HL-MALC 基因的动物免疫及攻蜱实验和 RNAi 实验
5.1 材料
5.1.1 蜱、组织收集、总 RNA 的提取和 cDNA 合成
5.1.2 试剂
5.1.3 仪器设备
5.2 方法
5.2.1 融合蛋白的大量纯化
5.2.2 蛋白免疫及攻蜱试验
5.2.3 RNAi 实验
5.2.3.1 Liner DNA template 的扩增
5.2.3.2 ds RNA 的制备
5.2.3.3 ds RNA 的显微注射
5.2.3.4 接种至兔体饲血
5.2.3.5 干扰效果分析
5.2.3.6 干扰后蜱的沉默效果
5.3 结果
5.3.1 rHL-Tm 免疫和攻蜱实验
5.3.2 rHL- MALC 免疫和攻蜱实验
5.3.3 RNAi 试验结果
5.3.3.1 dsRNA 的合成
5.3.3.2 RNA 干扰后目的基因的沉默效果评价
5.3.3.3 HL-Tm 沉默后对长角血蜱生物学特性的影响
5.3.3.4 HL-MALC 沉默后对长角血蜱生物学特性的影响
5.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简历
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]中秋蚕饲养管理技术[J]. 谢文革. 现代农业科技. 2013(04)
[2]浙江省蜱媒传染病监测研究[J]. 凌锋,龚震宇,柴程良,林君芬,孙继民,侯娟,吴海霞,刘起勇. 中国媒介生物学及控制杂志. 2013(01)
[3]蜱及蜱传病的研究进展[J]. 刘琪,王伟利,孟庆峰. 安徽农业科学. 2013(03)
[4]斑马鱼原肌球蛋白基因克隆表达及免疫学鉴定[J]. 李荔,陈樱麟,闫浩,刘志刚. 水产科学. 2013(01)
[5]甲状腺激素、肌钙蛋白Ⅰ和B型钠尿肽在急性冠状动脉综合征患者中的变化及预后评价[J]. 唐新,李永姝,贾克刚. 检验医学. 2012(12)
[6]莱姆病螺旋体优势抗原BmpA分子克隆、高效表达与亚细胞地位[J]. 宝福凯,赖名耀,文霞,董坚,柳爱华,陈明清. 中国病原生物学杂志. 2012(11)
[7]心力衰竭治疗前后心肌酶和肌钙蛋白T及C反应蛋白水平变化分析[J]. 葛晓丽. 中国全科医学. 2012(20)
[8]实验室条件下小亚璃眼蜱生活史观察[J]. 孙明,曾巧英,殷宏,关贵全,刘志杰,任巧云,罗建勋. 中国媒介生物学及控制杂志. 2011(04)
[9]长角血蜱新基因HL05全长序列的克隆与原核表达[J]. 张丽艳,刘光远,田占成,谢俊仁,龚真莉,刘建刚. 中国兽医科学. 2011(04)
[10]中国蜱传病主要流行趋势及防控科技对策[J]. 马广鹏,孙传范,赵娜,张西臣. 中国农业科技导报. 2011(02)
硕士论文
[1]动物蜱形态学鉴定核糖体及线粒体DNA多态性研究[D]. 马君.湖南农业大学 2011
本文编号：3610880
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3610880.html
