奶山羊产奶性状候选基因的筛选及其多基因聚合效应的研究

发布时间：2022-01-27 01:34

　　产奶性状是奶山羊的主要经济性状,包括产奶量、乳脂率和乳蛋白率等。目前,许多学者认为这些数量性状的表现不仅受微效多基因或QTL控制,而且也与主效基因调控密切相关。因此,寻找这些性状的主效基因或与之相连锁的分子标记,研究功能基因的调控机理,是开展奶山羊分子育种工作的前提。以分子标记辅助选择为核心的多基因聚合育种技术能直接在DNA水平上对产奶性状的基因型进行选择,克服了传统育种方法准确性低的问题,可显著加快遗传进展,提高育种效率。因此,将分子标记辅助育种技术与传统育种技术有效结合,集成创新新的育种技术体系是奶山羊育种发展的必然趋势。本研究选择对产奶性状有关键调控作用的PRLR、ELF5、MTHFR和FOLR1基因,采用PCR-RFLP和DNA测序技术研究这4个基因在西农萨能和关中奶山羊中的SNPs及其与产奶性状的关联性；采用实时定量PCR技术检测PRLR、ELF5和FOLR1基因在奶山羊10个组织中的相对表达量；克隆奶山羊PRLR、ELF5（?）FOLR1基因完整的CDS区,并进行生物信息学分析；从PRLR、ELF5、MTHFR和FOLR1基因中筛选对产奶性状有显著影响的基因位点,利用数量遗... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 乳业与人类文明
    1.2 中国奶业的概况与发展现状
    1.3 分子标记育种中常用方法及技术研究进展
        1.3.1 候选基因法
        1.3.2 常用分子标记技术
    1.4 产奶量与乳蛋白研究进展
        1.4.1 产奶量
        1.4.2 乳蛋白
    1.5 产奶性状相关候选基因的研究进展
        1.5.1 叶酸代谢通路基因
        1.5.2 E74类因子5(E74-like factor 5,ELF5)基因
        1.5.3 催乳素与催乳素受体基因
        1.5.4 生长激素和生长激素受体基因
        1.5.5 胰岛素样生长因子(IGFs)
    1.6 多基因聚合的研究进展
        1.6.1 基因聚合与基因聚合育种的概念
        1.6.2 多基因聚合育种的原理
        1.6.3 多基因聚合的方法
        1.6.4 基因聚合育种的研究进展
    1.7 本研究的目的意义
试验研究
    第二章 PRLR基因的克隆、表达及其SNPs与产奶性状的关联分析
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 试验动物
            2.2.2 主要试剂
            2.2.3 溶液的配置
            2.2.4 仪器设备
            2.2.5 基因组DNA的提取及检测
            2.2.6 RNA的提取及检测
            2.2.7 DNA的凝胶回收
            2.2.8 DNA克隆
            2.2.9 cDNA模板的制备
            2.2.10 实时定量PCR
            2.2.11 引物设计、PCR和酶切反应
            2.2.12 酶切产物检测
            2.2.13 核酸和蛋白序列分析
            2.2.14 数据统计与分析
        2.3 结果与分析
            2.3.1 山羊基因组DNA的检测结果
            2.3.2 山羊组织总RNA的检测结果
            2.3.3 山羊PRLR基因的克隆和生物信息学分析
            2.3.4 PRLR基因的Real time-PCR结果
            2.3.5 PRLR基因的PCR扩增结果
            2.3.6 山羊PRLR基因的SNPs检测
            2.3.7 PRLR基因SNPs测序图
            2.3.8 3'UTR突变对miRNA结合位点的影响
            2.3.9 PRLR基因SNP位点的遗传结构
            2.3.10 PRLR基因与山羊产奶性状的关联分析
        2.4 讨论
            2.4.1 Real time-PCR
            2.4.2 PRLR基因的组织表达
            2.4.3 PRLR基因突变对产奶性状的影响
        2.5 小结
    第三章 ELF5基因的克隆、表达及其SNPs与产奶性状的关联分析
        3.1 引言
        3.2 材料与方法
            3.2.1 引物设计
            3.2.2 实时定量PCR
        3.3 结果与分析
            3.3.1 山羊ELF5基因的克隆和生物信息学分析
            3.3.2 ELF5基因的实时定量PCR结果
            3.3.3 ELF5基因的PCR扩增结果
            3.3.4 山羊ELF5基因的SNPs检测
            3.3.5 ELF5基因SNPs测序图
            3.3.6 转录因子结合位点的预测结果
            3.3.7 ELF5基因SNP位点的遗传结构
            3.3.8 ELF5基因与山羊产奶性状的关联分析
        3.4 讨论
            3.4.1 ELF5基因的表达
            3.4.2 ELF5基因的多态性与产奶性能
        3.5 小结
    第四章 MTHFR基因的SNPs与产奶性状的关联分析
        4.1. 引言
        4.2 材料与方法
            4.2.1 引物设计、PCR和酶切反应
        4.3 结果与分析
            4.3.1 MTHFR基因的PCR扩增结果
            4.3.2 山羊MTHFR基因的SNPs检测
            4.3.3 MTHFR基因SNPs测序图
            4.3.4 转录因子结合位点的预测结果
            4.3.5 MTHFR基因SNP位点的遗传结构
            4.3.6 MTHFR基因与山羊产奶性状的关联分析
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 FOLR1基因的克隆、表达及SNP与产奶性状的关联分析
        5.1 引言
        5.2 材料与方法
            5.2.1 引物设计
        5.3 结果与分析
            5.3.1 山羊FOLR1基因的克隆和生物信息学分析
            5.3.2 FOLR1基因的实时定量PCR结果
            5.3.3 FOLR1基因的PCR扩增结果
            5.3.4 山羊FOLR1基因的SNPs检测
        5.4 讨论
            5.4.1 FOLR1基因的表达
            5.4.2 FOLR1基因的多态性
        5.5 小结
    第六章 PRLR、MTHFR和ELF5基因聚合对产奶性状的效应分析
        6.1 引言
        6.2 材料与方法
        6.3 结果与分析
        6.4 讨论
        6.5 小结
结论
创新点
进一步研究的问题
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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[2]山羊乳营养特性及对嗜酸乳杆菌增菌发酵效能的研究[D]. 葛武鹏.西北农林科技大学 2008
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硕士论文
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本文编号：3611500