基于猪CCR1和CCR5受体高通量细胞筛选模型的构建及其条件优化

发布时间：2022-01-27 02:08

　　为构建猪趋化因子受体1（CCR1）、趋化因子受体5（CCR5）真核表达载体并分析其信号通路,在细胞水平上初步探究了CC型趋化因子（RANTES）与CCR1和CCR5之间的关系,并建立CCR1和CCR5细胞模型并优化筛选条件,为筛选基于受体CCR1和CCR5的先导化合物防控相关猪病奠定基础。本文利用PCR技术从猪的肌肉组织中扩增出1062bp的CCR1基因片段和1059bp的CCR5基因片段。将猪CCR1和CCR5基因连接到真核表达载体pcDNA3.1（+）并获得重组质粒pcDNA3.1（+）-myc/CCR1和pcDNA3.1（+）-myc/CCR5。将重组质粒转染到HEK293T细胞中,通过RT-PCR技术和Western blotting技术鉴定目的基因的转录和翻译。将重组质粒分别与pGL4.29[1uc2P/CRE/Hygro]或pGL4.33[luc2P/SRE/Hygro]和pGL4.74[hRluc/TK]共转染到HEK293T细胞中,通过双荧光素酶报告基因法,使用微孔板多功能荧光素酶检测仪检测RANTES作用后荧光素酶的表达量。分别转染pcDNA3.1（+）-myc/CC... 

【文章来源】：中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集中国畜牧兽医学会会议论文集

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本文编号：3611550