H19/IGF2印记簇在骨骼肌发育中的调控机理初步研究
发布时间：2022-02-05 08:31
猪肉是我国居民重要的动物蛋白来源,随着国民生活水平的不断提高,人们对猪肉品质、产量的要求也越来越高。因此从改善肌肉发育等性状的角度来提高猪肉的品质和产量成为了猪遗传改良的重点。目前很多报道都已证实印记基因在骨骼肌的发育过程中发挥了不可替代的作用,其中就有H19-IGF2印记基因簇。已有的研究表明H19、IGF2呈反向表达模式,且H19内部生成的miR-675能抑制C2C12细胞增殖,siH19和过表达let7都能促进C2C12细胞分化,但目前H19/IGF2印记基因簇调控骨骼肌发育的机理还不是很清楚,在猪中未见报道。本研究较系统地揭示了H19、IGF2、miR-675印记簇基因及H19互作的let7家族基因在大白猪、梅山猪骨骼肌组织及成肌细胞C2C12分化过程中的表达规律,并对C2C12成肌分化过程中H19启动子甲基化水平、转录调控规律进行了研究。主要取得以下结果：（1）通过定量的方法证实H19、IGF2在梅山、大白猪骨骼肌发育中的表达规律是一致的,H19、IGF2在胚胎50d骨骼肌中的表达水平比95d略低,但胚胎期表达水平都极显著高于成年期。品种间比较发现,梅山猪胚胎50d和95d骨...
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 猪骨骼肌的发生发育过程
1.3 骨骼肌发育的分子机理
1.3.1 与肌肉发育相关的生肌调节因子
1.3.2 与肌肉发育相关的信号通路
1.3.3 miRNA对骨骼肌发育的重要调控作用
1.3.4 印记基因对骨骼肌发育的相关研究
1.4 H19/IGF2印记基因簇对骨骼肌发育有重要的调控作用
1.5 H19、IGF2的研究进展
1.5.1 印记基因的表达模式
1.5.2 甲基化对H19、IGF2的重要调控作用
1.5.3 转录因子对H19的调控作用
1.5.4 miRNA对H19调控研究
1.6 H19-IGF2印记基因簇内其他基因的研究进展
1.7 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 小鼠、猪组织样
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 细胞
2.1.4 试剂
2.1.5 主要试剂的配制
2.1.6 主要分子生物学软件及数据库
2.2 方法
2.2.1 细胞的培养
2.2.2 miRNAs及基因表达量分析
2.2.3 启动子载体的构建
2.2.4 细胞的转染
2.2.5 细胞的处理与收集
2.2.6 双荧光素酶检测及数据分析
2.2.7 甲基化检测及数据分析
2.3 本研究的技术路线
3 结果
3.1 H19、IGF2以及let7家族在大白、梅山猪三个时期中的组织表达规律检测
3.2 let7家族与H19以及pH值的相关性研究结果
3.3 在小鼠中H19、miR-675-3p组织表达谱
3.4 H19-IGF2印记基因簇相关基因在C2C12细胞分化过程中的表达情况
3.5 H19启动子转录活性检测
3.5.1 H19转录因子结合位点在线软件预测
3.5.2 H19启动子载体构建及双荧光活性检测
3.6 H19基因DMR区甲基化水平分析
3.6.1 H19基因CpG岛的在线预测
3.6.2 H19基因上游CTCF结合位点的确定
3.6.3 H19基因DMR区测序分析
3.6.4 卡方检验在各时间点C2C12细胞中4个CTCF位点的甲基化差异情况
4 讨论
4.1 关于H19基因在组织、细胞中的表达
4.2 关于H19-IGF2基因簇相关基因对H19的调控作用
4.3 关于miRNA对H19的调控研究
4.4 关于H19在C2C12细胞中的转录调控研究
5 小结
5.1 本研究的主要结果
5.2 本研究的创新点和特色
5.3 本研究的不足及下一步工作建议
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]H19基因研究进展[J]. 张小刚,安利国,郑晓飞. 军事医学. 2011(06)
[2]TGF-β/肌肉生长抑制素信号通路对骨骼肌作用的研究进展[J]. 张菊香,张鹏,陈晓萍. 航天医学与医学工程. 2011(03)
[3]let-7 microRNA调控动物器官发育的研究进展[J]. 王虹,滕鸿琦,施珏平,张彦定,张明凤. 生命科学. 2011(04)
[4]JAK2/STAT3信号通路对小鼠骨骼肌发育和能量代谢相关基因mRNA表达的影响[J]. 马佩云,孙超,张忠品,张朝,齐仁立. 农业生物技术学报. 2010(05)
[5]哺乳动物印记域DLK1-DIO3的研究进展[J]. 赵丽霞,赵高平,周欢敏. 遗传. 2010(08)
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路调控猪骨骼肌纤维类型变化的初步研究[D]. 杨秋梅.西北农林科技大学 2011
本文编号：3614915
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 猪骨骼肌的发生发育过程
1.3 骨骼肌发育的分子机理
1.3.1 与肌肉发育相关的生肌调节因子
1.3.2 与肌肉发育相关的信号通路
1.3.3 miRNA对骨骼肌发育的重要调控作用
1.3.4 印记基因对骨骼肌发育的相关研究
1.4 H19/IGF2印记基因簇对骨骼肌发育有重要的调控作用
1.5 H19、IGF2的研究进展
1.5.1 印记基因的表达模式
1.5.2 甲基化对H19、IGF2的重要调控作用
1.5.3 转录因子对H19的调控作用
1.5.4 miRNA对H19调控研究
1.6 H19-IGF2印记基因簇内其他基因的研究进展
1.7 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 小鼠、猪组织样
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 细胞
2.1.4 试剂
2.1.5 主要试剂的配制
2.1.6 主要分子生物学软件及数据库
2.2 方法
2.2.1 细胞的培养
2.2.2 miRNAs及基因表达量分析
2.2.3 启动子载体的构建
2.2.4 细胞的转染
2.2.5 细胞的处理与收集
2.2.6 双荧光素酶检测及数据分析
2.2.7 甲基化检测及数据分析
2.3 本研究的技术路线
3 结果
3.1 H19、IGF2以及let7家族在大白、梅山猪三个时期中的组织表达规律检测
3.2 let7家族与H19以及pH值的相关性研究结果
3.3 在小鼠中H19、miR-675-3p组织表达谱
3.4 H19-IGF2印记基因簇相关基因在C2C12细胞分化过程中的表达情况
3.5 H19启动子转录活性检测
3.5.1 H19转录因子结合位点在线软件预测
3.5.2 H19启动子载体构建及双荧光活性检测
3.6 H19基因DMR区甲基化水平分析
3.6.1 H19基因CpG岛的在线预测
3.6.2 H19基因上游CTCF结合位点的确定
3.6.3 H19基因DMR区测序分析
3.6.4 卡方检验在各时间点C2C12细胞中4个CTCF位点的甲基化差异情况
4 讨论
4.1 关于H19基因在组织、细胞中的表达
4.2 关于H19-IGF2基因簇相关基因对H19的调控作用
4.3 关于miRNA对H19的调控研究
4.4 关于H19在C2C12细胞中的转录调控研究
5 小结
5.1 本研究的主要结果
5.2 本研究的创新点和特色
5.3 本研究的不足及下一步工作建议
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]H19基因研究进展[J]. 张小刚,安利国,郑晓飞. 军事医学. 2011(06)
[2]TGF-β/肌肉生长抑制素信号通路对骨骼肌作用的研究进展[J]. 张菊香,张鹏,陈晓萍. 航天医学与医学工程. 2011(03)
[3]let-7 microRNA调控动物器官发育的研究进展[J]. 王虹,滕鸿琦,施珏平,张彦定,张明凤. 生命科学. 2011(04)
[4]JAK2/STAT3信号通路对小鼠骨骼肌发育和能量代谢相关基因mRNA表达的影响[J]. 马佩云,孙超,张忠品,张朝,齐仁立. 农业生物技术学报. 2010(05)
[5]哺乳动物印记域DLK1-DIO3的研究进展[J]. 赵丽霞,赵高平,周欢敏. 遗传. 2010(08)
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路调控猪骨骼肌纤维类型变化的初步研究[D]. 杨秋梅.西北农林科技大学 2011
本文编号：3614915
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