携带卵清蛋白T细胞表位的兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究
发布时间：2022-02-08 21:41
兔出血症（Rabbit Hemorrhagic Disease, RHD）是由兔出血症病毒（Rabbit Hemorrhagic Disease Virus, RHDV）引起的兔的一种急性、败血性、高度接触性传染病,以致死性和全身实质器官出血为主要特征。RHDV是杯状病毒科成员,结构简单,在兔体内可以诱导机体产生体液免疫应答、细胞免疫应答和粘膜免疫应答,还有极强的诱导干扰素产生的能力。RHDV仅有一个主要结构蛋白VP60, VP60在动物体内可诱导产生中和抗体,与免疫反应直接相关,是病毒免疫保护性抗原。VP60衣壳蛋白在体外可自然聚合成不包裹核酸的、与天然RHDV病毒粒子在物理形态上类似的病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）、这种病毒样颗粒具有良好的免疫原性,本身可作免疫佐剂,通过胞吞或胞饮途径进入抗原提呈细胞,分别诱导体液免疫应答和细胞免疫应答。有研究证实这种病毒样颗粒也可嵌合表达外源基因,或作为疫苗载体。为了探究兔出血症病毒样颗粒（RHDV-VLPs）容纳外源表位的能力,了解其适宜的外源片段插入位点,探索嵌合VLPs的组装及其免疫原性,初步评价RHDV...
【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
縮略词表
第一章 文献综述：兔出血症(RHD)的研究进展
1 兔病毒性出血症的流行现状
2 RHDV的分类
3 RHDV的形态特征
4 RHDV病毒基因组结构与功能
5 结构蛋白
5.1 VP60
5.2 VP10
6 非结构蛋白
7 病毒的理化特性
8 病毒的血凝性
9 血清型及进化特点
10 RHDV致病性
11 RHDV的培养
12 RHDV的实验室检测
13 不同载体表达兔出血症病毒VP60蛋白的研究进展
13.1 杆状病毒—昆虫细胞表达系统
13.2 大肠杆菌表达系统
13.3 酵母表达系统
13.4 植物表达系统
13.5 腺病毒表达载体
14 兔出血症灭活疫苗研究进展
15 兔出血症病毒重组病毒疫苗
16 关于RHDV疫苗存在的问题与展望
参考文献
第二章 ：四种携带OVA CD8~+T细胞表位重组穿梭载体的构建
摘要
1 材料与方法
1.1 质粒、菌种
1.2 主要试剂与工具酶
1.3 核酸序列分析
1.4 构建图示
1.5 引物设计
1.6 目的基因的扩增
1.6.1 常规方法PCR构建目的基因G-V-0-579
1.6.2 重叠区扩增基因拼接法(SOE法)构建目的基因G-v-o-502-510、G-v-o-411-417、G-v-o-302-309
1.7 T/A克隆与鉴定
1.8 重组转移载体的构建与鉴定
1.9 穿梭载体Bacmid的构建与鉴定
2 结果
2.1 重组穿梭载体Bacmid-V-579的构建
2.2 重组穿梭载体Bacmid-V-502-510、Bacmid-V-411-417、Bacmid-V-302-309的构建
3 讨论
3.1 外源表位插入位置的选择
3.2 SOE法操作要点
参考文献
ABSTRACT
第三章 ：四种嵌合蛋白的表达及鉴定
摘要
1 材料与方法
1.1 质粒、菌株与细胞
1.2 主要试剂与工具酶
1.3 重组杆状病毒的构建和筛选
1.4 重组病毒的传代与初步鉴定
1.5 表达产物的鉴定
2 结果
2.1 重组蛋白的表达鉴定
2.2 红细胞凝集特性鉴定
3 讨论
3.1 嵌合蛋白的红细胞凝集特性
3.2 免疫荧光和western blot
3.3 RHDV VLPs的构建
参考文献
ABSTRACT
第四章 嵌合蛋白的电镜观察和免疫原性研究
摘要
1 材料与方法
1.1 试剂、培养基及重组病毒
1.2 实验动物
1.3 嵌合蛋白的电镜观察
1.4 嵌合蛋白免疫原性的研究
2 结果
2.1 电镜观察
2.2 小鼠血清中VP60抗体水平的检测
2.3 小鼠血清中TNF-α的含量检测
3 讨论
3.1 电镜观察重组蛋白VLPs的形成
3.2 插入位点与体液免疫应答相关性
3.3 VLPs与细胞免疫应答相关性
参考文献
ABSTRACT
全文总结
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔出血症病毒JL株分离鉴定及VP60基因主要抗原表位分析[J]. 金明兰,侯继波,郑其升,鲁会军,韩松,南文龙,金宁一. 中国兽医学报. 2012(06)
[2]兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 张大鹏,吕宁,符容婕,郭蔼光. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(03)
[3]靶向树突状细胞的肿瘤疫苗OVA慢病毒载体构建及其体外抗肿瘤效应[J]. 陈帅,李浩博,李牧,杨耀琴,陶惠红,赵培林. 同济大学学报(医学版). 2012(01)
[4]兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价[J]. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东. 中国兽医学报. 2011(11)
[5]兔出血症病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的实验研究[J]. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[6]兔瘟精制卵黄抗体的实验室制备及检验[J]. 汤少伟. 畜牧兽医科技信息. 2010(07)
[7]兔出血症病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建、表达及其免疫原性[J]. 胡波,王芳,秦爱建,范志宇,徐为中,张则斌,薛家宾,何孔旺. 江苏农业学报. 2009(06)
[8]兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性[J]. 刘怀然,刘家森,胡迎东,陈洪岩,单安山,曲连东. 中国比较医学杂志. 2007(08)
[9]兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 王芳,李超美,杨龙圣,徐为中,张则斌,侯玉峰,陈国强,何孔旺. 农业生物技术学报. 2007(03)
[10]一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析[J]. 田浪,王红宁,李建文,廖娟,张夏兰,周万蓉,王鸿宾. 畜牧兽医学报. 2006(10)
硕士论文
[1]兔出血症病毒衣壳蛋白基因在家蚕中的表达[D]. 王树坤.中国农业科学院 2012
本文编号：3615800
【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
縮略词表
第一章 文献综述：兔出血症(RHD)的研究进展
1 兔病毒性出血症的流行现状
2 RHDV的分类
3 RHDV的形态特征
4 RHDV病毒基因组结构与功能
5 结构蛋白
5.1 VP60
5.2 VP10
6 非结构蛋白
7 病毒的理化特性
8 病毒的血凝性
9 血清型及进化特点
10 RHDV致病性
11 RHDV的培养
12 RHDV的实验室检测
13 不同载体表达兔出血症病毒VP60蛋白的研究进展
13.1 杆状病毒—昆虫细胞表达系统
13.2 大肠杆菌表达系统
13.3 酵母表达系统
13.4 植物表达系统
13.5 腺病毒表达载体
14 兔出血症灭活疫苗研究进展
15 兔出血症病毒重组病毒疫苗
16 关于RHDV疫苗存在的问题与展望
参考文献
第二章 ：四种携带OVA CD8~+T细胞表位重组穿梭载体的构建
摘要
1 材料与方法
1.1 质粒、菌种
1.2 主要试剂与工具酶
1.3 核酸序列分析
1.4 构建图示
1.5 引物设计
1.6 目的基因的扩增
1.6.1 常规方法PCR构建目的基因G-V-0-579
1.6.2 重叠区扩增基因拼接法(SOE法)构建目的基因G-v-o-502-510、G-v-o-411-417、G-v-o-302-309
1.7 T/A克隆与鉴定
1.8 重组转移载体的构建与鉴定
1.9 穿梭载体Bacmid的构建与鉴定
2 结果
2.1 重组穿梭载体Bacmid-V-579的构建
2.2 重组穿梭载体Bacmid-V-502-510、Bacmid-V-411-417、Bacmid-V-302-309的构建
3 讨论
3.1 外源表位插入位置的选择
3.2 SOE法操作要点
参考文献
ABSTRACT
第三章 ：四种嵌合蛋白的表达及鉴定
摘要
1 材料与方法
1.1 质粒、菌株与细胞
1.2 主要试剂与工具酶
1.3 重组杆状病毒的构建和筛选
1.4 重组病毒的传代与初步鉴定
1.5 表达产物的鉴定
2 结果
2.1 重组蛋白的表达鉴定
2.2 红细胞凝集特性鉴定
3 讨论
3.1 嵌合蛋白的红细胞凝集特性
3.2 免疫荧光和western blot
3.3 RHDV VLPs的构建
参考文献
ABSTRACT
第四章 嵌合蛋白的电镜观察和免疫原性研究
摘要
1 材料与方法
1.1 试剂、培养基及重组病毒
1.2 实验动物
1.3 嵌合蛋白的电镜观察
1.4 嵌合蛋白免疫原性的研究
2 结果
2.1 电镜观察
2.2 小鼠血清中VP60抗体水平的检测
2.3 小鼠血清中TNF-α的含量检测
3 讨论
3.1 电镜观察重组蛋白VLPs的形成
3.2 插入位点与体液免疫应答相关性
3.3 VLPs与细胞免疫应答相关性
参考文献
ABSTRACT
全文总结
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔出血症病毒JL株分离鉴定及VP60基因主要抗原表位分析[J]. 金明兰,侯继波,郑其升,鲁会军,韩松,南文龙,金宁一. 中国兽医学报. 2012(06)
[2]兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 张大鹏,吕宁,符容婕,郭蔼光. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(03)
[3]靶向树突状细胞的肿瘤疫苗OVA慢病毒载体构建及其体外抗肿瘤效应[J]. 陈帅,李浩博,李牧,杨耀琴,陶惠红,赵培林. 同济大学学报(医学版). 2012(01)
[4]兔出血症病毒VP60基因真核表达质粒的构建及初步评价[J]. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东. 中国兽医学报. 2011(11)
[5]兔出血症病毒TP株VP60基因DNA免疫小鼠的实验研究[J]. 原冬伟,刘家森,郭东春,司昌德,姜骞,林欢,穆亚芳,刘行波,曲连东. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[6]兔瘟精制卵黄抗体的实验室制备及检验[J]. 汤少伟. 畜牧兽医科技信息. 2010(07)
[7]兔出血症病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建、表达及其免疫原性[J]. 胡波,王芳,秦爱建,范志宇,徐为中,张则斌,薛家宾,何孔旺. 江苏农业学报. 2009(06)
[8]兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性[J]. 刘怀然,刘家森,胡迎东,陈洪岩,单安山,曲连东. 中国比较医学杂志. 2007(08)
[9]兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 王芳,李超美,杨龙圣,徐为中,张则斌,侯玉峰,陈国强,何孔旺. 农业生物技术学报. 2007(03)
[10]一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析[J]. 田浪,王红宁,李建文,廖娟,张夏兰,周万蓉,王鸿宾. 畜牧兽医学报. 2006(10)
硕士论文
[1]兔出血症病毒衣壳蛋白基因在家蚕中的表达[D]. 王树坤.中国农业科学院 2012
本文编号：3615800
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