基于Cap蛋白的鹅星状病毒遗传进化、单抗制备及定量检测技术研究
发布时间：2022-02-12 18:34
自2016年5月以来,安徽、江苏、山东、云南、四川等养鹅场爆发一种以痛风为主要病症的传染病,该病表现为腿关节腔充满白色浆液及肾脏尿酸盐沉积导致肾炎,5-19日龄雏鹅易感,死亡率高达30%,给养鹅业及相关产业带来严重经济损失。本研究首先对实验室对2016-2019年从各地采集的RT-PCR鹅星状病毒（Goose Astroviruses,GoAstV）阳性临床发病鹅样品,进行回顾性分析,对其中有时间和地区代表性毒株的ORF1b（编码RNA依赖性RNA聚合酶蛋白）,ORF2（编码病毒衣壳蛋白）基因序列比对分析。结果表明,样本LA1605,ZJ1703,ZJ1704,ADY1708,LY1912与中国现已发表的多株鹅星状病毒基因序列同源性高达99.9%。构建GoAstV Cap原核表达载体pET-30a-rCap,转化BL21（DE3）后使用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达,大量表达并纯化带有His标签的rCap重组蛋白,获得浓度为0.74 mg/mL的重组蛋白。将纯化的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用酶联免疫吸附试验（Enzyme li...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
星状病毒基因组结构及衣壳蛋白结构模式图(Cortezetal.,2017)
图 2.1 GoAstV ORF1b 基因的 PCR 扩增结果 M：Trans 2KTM PlusⅡ DNA 标准分子量；1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 毒株 ORF1b 片段；11：阴性对照 Fig.2.1 Amplification of GAstV ORF1b gene Lane M：Trans 2KTM Plus Ⅱ DNA marker； Lane 1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 poison ORF1b gene；11：negative control
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 鹅星状病毒流行病学调查及遗传进化分析 2.3 实验结果 2.3.1 样本 PCR 检测结果 样品分别为来自 2016 年 5 月至 2019 年 12 月期间安徽等地区各养殖场，共有 10 份患病鹅组织样本。对上述样本提取 RNA 进行 GoAstV PCR 检测，PCR 结果显示 10 份样品全部为阳性，PCR产物凝胶电泳图如下所示（图 2.1，图 2.2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鹅星状病毒LAMP快速检测方法的建立与应用[J]. 张玉霞,杨金兴,孟凯,蔡李萌,袁小远,王友令. 中国预防兽医学报. 2019(11)
[2]新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定[J]. 章丽娇,黄欣梅,刘飞,刘青涛,韩凯凯,赵冬敏,杨婧,刘宇卓,李银. 江苏农业学报. 2019(05)
[3]人星状病毒1型野毒株的培养及生物学鉴定[J]. 梁雪雪,刘鹏飞,谭李倩,李明,赵微. 中国现代医学杂志. 2018(23)
[4]鸡星状病毒研究进展[J]. 武宗仪,孔正茹,秦爱建,钱琨. 中国家禽. 2018(08)
[5]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物学通报. 2016(02)
[6]TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展[J]. 姜文灿,岳素文,江洪,王成彬. 临床检验杂志(电子版). 2015(01)
[7]犬细小病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定[J]. 韩燕,朱玲,周远成,廖春燕,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2014(03)
[8]一株新型鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定[J]. 陈宗艳,朱英奇,王世传,李传峰,李露,王玢缤,付玉志,高景鹏,王超,刘光清. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[9]实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用[J]. 徐楠楠,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2011(21)
[10]SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,谢芝勋,唐熠,谢丽基,刘加波,庞耀姗,邓显文,谢志勤. 广西农业科学. 2010(04)
本文编号：3622224
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
星状病毒基因组结构及衣壳蛋白结构模式图(Cortezetal.,2017)
图 2.1 GoAstV ORF1b 基因的 PCR 扩增结果 M：Trans 2KTM PlusⅡ DNA 标准分子量；1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 毒株 ORF1b 片段；11：阴性对照 Fig.2.1 Amplification of GAstV ORF1b gene Lane M：Trans 2KTM Plus Ⅱ DNA marker； Lane 1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 poison ORF1b gene；11：negative control
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 鹅星状病毒流行病学调查及遗传进化分析 2.3 实验结果 2.3.1 样本 PCR 检测结果 样品分别为来自 2016 年 5 月至 2019 年 12 月期间安徽等地区各养殖场，共有 10 份患病鹅组织样本。对上述样本提取 RNA 进行 GoAstV PCR 检测，PCR 结果显示 10 份样品全部为阳性，PCR产物凝胶电泳图如下所示（图 2.1，图 2.2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鹅星状病毒LAMP快速检测方法的建立与应用[J]. 张玉霞,杨金兴,孟凯,蔡李萌,袁小远,王友令. 中国预防兽医学报. 2019(11)
[2]新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定[J]. 章丽娇,黄欣梅,刘飞,刘青涛,韩凯凯,赵冬敏,杨婧,刘宇卓,李银. 江苏农业学报. 2019(05)
[3]人星状病毒1型野毒株的培养及生物学鉴定[J]. 梁雪雪,刘鹏飞,谭李倩,李明,赵微. 中国现代医学杂志. 2018(23)
[4]鸡星状病毒研究进展[J]. 武宗仪,孔正茹,秦爱建,钱琨. 中国家禽. 2018(08)
[5]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 王玉倩,薛秀花. 生物学通报. 2016(02)
[6]TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展[J]. 姜文灿,岳素文,江洪,王成彬. 临床检验杂志(电子版). 2015(01)
[7]犬细小病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定[J]. 韩燕,朱玲,周远成,廖春燕,徐志文,郭万柱. 中国兽医学报. 2014(03)
[8]一株新型鸭源呼肠孤病毒（TH11株）的分离与鉴定[J]. 陈宗艳,朱英奇,王世传,李传峰,李露,王玢缤,付玉志,高景鹏,王超,刘光清. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[9]实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用[J]. 徐楠楠,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2011(21)
[10]SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,谢芝勋,唐熠,谢丽基,刘加波,庞耀姗,邓显文,谢志勤. 广西农业科学. 2010(04)
本文编号：3622224
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