柔嫩艾美耳球虫在鸡巨噬细胞中的培养及子孢子感染巨噬细胞细胞因子的mRNA水平

发布时间：2022-02-13 01:01

　　以鸡巨噬细胞（HD11）为柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）的宿主细胞,将E.tenella子孢子体外接种HD11细胞,观察其入侵细胞、发育及诱导细胞抗感染免疫情况。用荧光探针和real-time PCR方法分别检测细胞内NO和ROS的含量和E.tenella感染相关的8种宿主细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7）mRNA水平。结果显示,E.tenella子孢子成功入侵HD11细胞,但并没有发育迹象。与不刺激组相比,活子孢子刺激后HD11细胞内NO含量在4 hpi显著升高,8 hpi达到最高并且随时间变化不再降低,而ROS含量在2 hpi显著升高,6 hpi达到最高并且随时间变化逐渐降低。与不刺激组相比,活子孢子刺激HD11细胞IL-1β和iNOS mRNA表达水平在6 hpi显著增加（P<0.05）,IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7在10 hpi显著增加（P<0.05）。与不刺激组相比,热灭活子孢子刺激后HD11细胞IL-6和IFN-γmRN... 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

灭菌的E.tenella孢子化卵囊和纯化的子孢子

鉴于文献报道[8]称,E.tenella子孢子在CEK细胞内可以发育成卵囊,为了对比观察子孢子的发育情况,同时进行E.tenella在CEK细胞中的培养。无菌纯化的E.tenella子孢子接种CEK细胞,发现卵囊,表明E.tenella在CEK细胞上培养成功。以下仅展示部分特征性变化时间点:在接种48 h时发现第1代裂殖体(图3A);在接种96 h时发现第2代裂殖体(图3B);在接种192 h时发现卵囊(图3C)。2.1.4 接种时间的确定

为确定子孢子接种HD11细胞的最佳接种剂量,将不同剂量的E.tenella子孢子接种HD11细胞,4 h后统计其入侵率。结果显示,当子孢子和细胞比为1∶2时,入侵率很低,观察非常困难;当子孢子和细胞比为1∶1时,入侵率为31.14%,培养至50 h后细胞大量脱落;当子孢子和细胞比为1.5∶1时,入侵率为34.98%,培养至48 h后细胞脱落(图2);当子孢子和细胞比为大于等于2∶1时,此时虽然入侵率变化不大(图5),但是由于子孢子数量太多,对细胞的直接损伤严重,导致培养时间急剧缩短。结果表明,子孢子和细胞比为1.5∶1为最佳接种剂量。图4 E.tenella子孢子接种HD11细胞入侵率随时间的变化

【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡白细胞介素6研究进展[J]. 赵娜,李烨初,张小荣,吴艳涛.  上海畜牧兽医通讯. 2013(01)

博士论文
[1]柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞的转录组学及蛋白质组学分析[D]. 王秀臻.山东农业大学 2018
[2]结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白调控巨噬细胞功能的研究[D]. 屈野.中国人民解放军军事医学科学院 2013



本文编号：3622620