禽致病性大肠杆菌Ⅵ型分泌系统2 DotU的功能研究及毒力基因多重PCR方法的建立

发布时间：2022-02-13 20:07

　　禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli, APEC）可导致鸡、鸭等多种禽类的肠道外疾病,临床症状复杂多样,包括心包炎、肝周炎、气囊炎、腹膜炎、败血症和脑炎等,该病波及范围广,严重制约着各地养禽业的健康发展。除了禽类,它还可以导致小鼠的脑膜炎症状,无疑对人类健康构成了潜在的威胁。毒力因子是APEC致病过程中的重要因素。已发现的APEC毒力因子主要包括黏附素、侵袭素、抗血清存活因子、铁摄取系统、空泡形成毒素以及其他毒力因子。有研究证明,APEC与人类肠道外致病性大肠杆菌（Extraintestinal Pathogenic E. coli, ExPEC）利用共同的毒力基因贮存库,因此,加强对APEC毒力因子的监测和研究,对于养禽业和公共卫生均具有重要意义。APEC的致病力是由多种毒力因子共同作用的结果,新的毒力因子的发现将有助于APEC致病机理的阐述。Ⅵ型分泌系统（Type VI secretion system, T6SS）是新近发现的革兰氏阴性菌的蛋白分泌系统。研究证明,T6SS在不同菌中扮演多样的角色,包括促进毒力、抑制细菌的复制和毒力以... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号及缩略语说明
第一篇 文献综述
    第一章 禽致病性大肠杆菌概述
        1 病原学
        2 流行病学
        3 临床症状和病理变化
        4 致病机理
        5 肠道外致病性大肠杆菌毒力因子研究进展
            5.1 黏附素
            5.2 侵袭素
            5.3 抗血清存活因子
            5.4 摄铁系统
            5.5 毒素
            5.6 毒力基因调控子
            5.7 其它毒力因子
        参考文献
    第二章 Ⅵ型分泌系统概述
        1 细菌的分泌系统
        2 T6SS的发现
            2.1 T6SS的发现与命名
            2.2 致病性大肠杆菌中的T6SS
        3 T6SS的组分及运转机制
            3.1 T6SS的基因结构及蛋白组成
            3.2 T6SS的运转机制
        4 Ⅵ型分泌系统的功能研究进展
            4.1 毒力因子
            4.2 抗毒力因素
            4.3 调节菌间关系
            4.4 T6SS的功能多样性
        参考文献
第二篇 试验研究
    第三章 禽致病性大肠杆菌毒力基因多重PCR方法的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 引物设计
            1.4 菌液的培养及PCR模板的制备
            1.5 单基因PCR扩增
            1.6 多重PCR反应体系的建立及优化
            1.7 多重PCR的特异性试验
            1.8 多重PCR的敏感性试验
            1.9 APEC毒力基因的多重PCR检测
        2 结果
            2.1 单基因PCR扩增结果
            2.2 多重PCR反应体系的建立及优化
            2.3 多重PCR特异性检测结果
            2.4 多重PCR敏感性检测结果
            2.5 APEC的毒力基因检测结果
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 禽致病性大肠杆菌T6SS基因的序列分析、流行病学调查及克隆表达
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株、质粒和实验动物
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 DE719 T6SS序列测定及dotU基因的分布
            1.4 重组表达载体的构建及转化
            1.5 融合蛋白的表达
            1.6 融合蛋白的纯化
            1.7 兔抗血清的制备
            1.8 DotU在DE719中的表达
        2 结果
            2.1 DE719 T6SS序列及dotU基因的分布率
            2.2 重组表达载体的构建与鉴定
            2.3 融合蛋白的表达与纯化
            2.4 兔抗血清的制备及鉴定
            2.5 DotU在DE719中的表达
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第五章 禽致病性大肠杆菌DE719 T6SS2基因缺失株、互补株的构建及特性分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株和质粒
            1.2 主要试剂和仪器
            1.3 实验动物及细胞
            1.4 缺失引物及缺失株鉴定引物
            1.5 DE719电转感受态制备及DE719-pKD46的构建
            1.6 基因缺失株的构建
            1.7 互补株的构建
            1.8 荧光定量PCR检测dotU表达水平
            1.9 生长曲线及运动性测定
            1.10 凝集试验
            1.11 环境耐受力试验
            1.12 血清杀菌试验
            1.13 黏附侵袭试验及细胞凋亡检测
            1.14 胞内存活试验及细胞因子检测
            1.15 体内致病力试验
            1.16 分泌蛋白的检测
        2 结果
            2.1 缺失株、互补株的构建及鉴定
            2.2 生长曲线及运动性
            2.3 凝集试验
            2.4 环境耐受力试验
            2.5 血清杀菌试验
            2.6 黏附侵袭试验及细胞凋亡检测
            2.7 胞内存活试验及细胞因子检测
            2.8 体内致病力试验
            2.9 分泌蛋白的检测
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]禽致病性大肠杆菌江苏、安徽分离株的生物学特性分析[J]. 白灏,冀辉,韩先干,龚建森,董洪亮,丁铲,祁克宗,于圣青.  微生物学通报. 2013(07)
[2]禽致病性大肠杆菌IMT5155疑似毒力基因在人源及动物源大肠杆菌中的分布[J]. 王少辉,戴建君,陆承平.  微生物学报. 2011(07)
[3]38株鸭源大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 吴信明,连洪梅,王艳,赵蕾,汪洋,沈志强.  中国畜牧兽医. 2010(10)
[4]鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析[J]. 陈文静,韩先干,何亮,胡青海,于圣青.  中国动物传染病学报. 2010(02)
[5]毒力岛基因ibeT有助于大肠杆菌抵抗人脑微血管内皮细胞溶酶体的降解[J]. 张可,赵伟东,李强,方文刚,朱莉,陈誉华.  生物化学与生物物理进展. 2009(04)
[6]真核细胞非经典蛋白分泌途径[J]. 张楠楠,刘欣,孙晶,吴毓,李庆伟.  遗传. 2009(01)
[7]禽致病性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的分子流行病学调查[J]. 金文杰,郑志明,秦爱建,刘岳龙,邵红霞,张永志,黄训良.  中国兽医科学. 2006(10)
[8]大肠杆菌α-溶血素分泌系统基因表达调控研究进展[J]. 周立雄,张兆山.  生物技术通讯. 2004(04)
[9]我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J]. 高崧,刘秀梵,张如宽,焦新安,文其乙,吴长新,唐一鸣,朱晓波,李琮,陈娟,崔力兵,崔洪平.  畜牧兽医学报. 1999(02)
[10]细菌外膜蛋白的研究现状[J]. 赵香汝,杨汉春.  中国兽医杂志. 1997(12)



本文编号：3623838