野鸟源禽流感病毒（AIV）分离株的遗传进化及其致病性研究

发布时间：2022-02-14 16:46

　　野鸟作为禽流感病毒的天然宿主和原始病毒库,伴随着其迁徙的季节性,跨地域性及长距离性等特点,在禽流感病毒全球范围内的广泛传播中扮演着重要的角色。我国东北地区生态环境丰富多样,森林、湿地、湖泊、平原及沼泽草甸等自然生境为多种鸟类的栖息繁衍提供了良好的天然条件,是东北亚野鸟迁徙的重要通道。为了掌握该地区禽流感病毒野生宿主分布特点,掌握其遗传变异规律,为防制禽流感提供科学依据,我们在2012年3月至2013年5月对该地区野鸟禽流感病原进行了调查,并分析了分离株的分子特征、遗传进化及其对不同宿主的致病性。1.野鸟源禽流感病毒的分离与鉴定2012年3至2013年5月对东北地区三个省份及河北秦皇岛主动开展了野生鸟类禽流感病原分子流行病学调查,共采集样野鸟个体1279份,包括6个目,30个属,57个种。通过鸡胚传代分离纯化病毒、血凝抑制及RT-PCR确定禽流感病毒亚型,结果有14个野鸟AIV检测为阳性,阳性率为1.09%。阳性样本中有7株H3N8亚型,3株H5N1亚型,2株H3N2亚型,1株H6N2,1株H6N6,其中首次从野生雀形目黄眉柳莺中分离到了一株高致病性H5N1禽流感病毒,首次从野生鸳鸯中分... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 禽流感病毒概述
    1.2 禽流感病毒的结构及其生物学功能
        1.2.1 表面糖蛋白及其功能
        1.2.2 聚合酶蛋白(Polymerase,PB2、PB1、PA)及其功能
        1.2.3 核蛋白(Nucleoprotein,NP)及其功能
        1.2.4 基质蛋白(Matrix proteins,M)及其功能
        1.2.5 非结构蛋白(Nonstructural proteins,NS)及其功能
    1.3 野鸟在禽流感流行病学中的地位
        1.3.1 东北地区野鸟概况
        1.3.2 禽流感病毒在野鸟中的分布特点
        1.3.3 野鸟在禽流感病毒传播中的作用
    1.4 项目研究的目的与意义
2 野鸟源禽流感病毒的分离与鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 样品的采集
        2.1.2 SPF鸡胚及1% SPF鸡红血球
        2.1.3 主要试剂及仪器
        2.1.4 禽流感病毒亚型诊断引物
    2.2 方法
        2.2.1 1%鸡红血球制备
        2.2.2 样品的处理
        2.2.3 病毒的分离
        2.2.4 病毒RNA提取
        2.2.5 反转录合成cDNA
        2.2.6 RT-PCR鉴定
        2.2.7 RT-PCR产物鉴定
    2.3 结果
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
3 三株野鸟源H5N1亚型禽流感病毒的遗传进化及其致病性分析
    3.1 材料
        3.1.1 病毒
        3.1.2 SPF鸡胚和实验动物
        3.1.3 主要试剂及仪器
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 病毒RNA提取
        3.2.2 反转录合成cDNA
        3.2.3 RT-PCR片段扩增
        3.2.4 PCR产物的鉴定与纯化
        3.2.5 病毒全基因组测序
        3.2.6 分子特征分析及系统进化树的构建
        3.2.7 动物致病性试验
    3.3 结果
        3.3.1 同源性比较
        3.3.2 分子特征分析
        3.3.3 HA和NA基因分子进化研究
        3.3.4 对鸡和鸭的致病性研究
        3.3.5 对小鼠致病性研究
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
4 野鸟源H3N8亚型禽流感病毒的遗传进化及其致病性分析
    4.1 材料
        4.1.1 病毒
        4.1.2 SPF鸡胚和实验动物
        4.1.3 主要试剂及仪器
        4.1.4 引物
    4.2 方法
    4.3 结果
        4.3.1 同源性比较
        4.3.2 分子特征分析
        4.3.3 HA和NA基因分子进化研究
        4.3.4 对鸡和鸭的致病性研究
        4.3.5 对小鼠的致病性研究
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
5 一株野鸟源H3N2亚型禽流感病毒的遗传进化及其致病性分析
    5.1 材料
        5.1.1 病毒
        5.1.2 SPF鸡胚和实验动物
        5.1.3 主要试剂及仪器
        5.1.4 引物
    5.2 方法
    5.3 结果
        5.3.1 同源性比较
        5.3.2 分子特征分析
        5.3.3 HA和NA基因分子进化研究
        5.3.4 对鸡和鸭的致病性研究
        5.3.5 对小鼠的致病性研究
    5.4 讨论
    5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]1998～2008年中国中部H9N2亚型AIV分离毒株HA基因的进化分析[J]. 赵军,柴丽娜,王泽霖.  病毒学报. 2011(02)
[2]H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定[J]. 佘利旋,熊永忠,远立国,袁天梅,贾坤,李守军.  中国预防兽医学报. 2011(01)
[3]1968年香港流感（H3N2）病原学概述[J]. 杜宁,杨霄星,蓝雨,温乐英,李晓丹,高荣保,郭元吉,李德新,舒跃龙.  病毒学报. 2009(S1)
[4]H3N2亚型猪流感病毒HA基因序列测定及抗原性分析[J]. 刘大飞,杨涛,刘明,刘春国,桑学波,刘大程.  动物医学进展. 2008(03)
[5]禽流感病毒的分子生物学研究进展[J]. 傅生芳,独军政,常惠芸,陈怀涛.  动物医学进展. 2005(05)
[6]吉林省鸟类多样性研究[J]. 高玮,王海涛,方林,张卓,杨志杰.  东北师大学报(自然科学版). 2005(01)
[7]禽流感病毒分子生物学研究进展[J]. 黄瑜,彭春香,傅光华,程龙飞,李文杨,施少华.  福建畜牧兽医. 2004(S1)
[8]全球禽流感的流行形势[J]. 甘孟侯.  中国预防兽医学报. 2004(06)
[9]禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展[J]. 曹梅,田夫林,庄文忠.  动物医学进展. 2004(02)
[10]禽流感病毒分子生物学特性及其诊断进展[J]. 高利波.  云南畜牧兽医. 2003(02)

硕士论文
[1]福建省H3N2亚型流感病毒分子流行病学特征分析[D]. 谢剑锋.福建医科大学 2012



本文编号：3624914