转录激活因子ATF2对伪狂犬病毒感染PK-15细胞的作用研究

发布时间：2022-02-15 05:30

　　伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）是疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科中的重要成员。伪狂犬病是PRV引发的猪的重要传染病之一,对养猪行业造成了巨大的经济损失。目前伪狂犬病已被农业部列为优先防治的16种动物疫病之一。因此研究PRV复制、与宿主之间互作等过程对寻找治疗α-疱疹病毒的药物靶点、研制新型疫苗是十分必要的。本课题以伪狂犬病毒（PRV）为材料,系统地研究猪肾上皮细胞（PK-15）在PRV感染后的信号通路转导过程。应用iTRAQ联用LC-MS/MS技术获取宿主蛋白质磷酸化水平的全局动态并基于生物信息学全面分析PRV感染对PK-15蛋白质磷酸化的影响。应用siRNA敲低atf2等基因表达、抑制剂阻断MAPK Pathway（ERK、JNK、p38通路）信号传导、慢病毒gRNA表达系统及Cas9表达细胞系构建atf2基因缺失细胞系、超表达atf2完整型及69/71苏氨酸磷酸化位点突变型表达质粒等实验方法,研究atf2基因及MAPK Pathway对PRV复制的影响。期望从宿主磷酸化蛋白质组学入手,对PRV在PK-15中的增殖机制进行深入研究。该研究可以对寻找PRV增殖依赖... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PRV粒子结构示意图

atf2 基因与许多基因的启动子调控有关，包括与炎症信号通路相关的干扰素β1(Lau E. et al 2015)、细胞周期相关的 cyclin A(Shimizu M. et al 1998)和糖基化相图 1-2ATF2 的结构与磷酸化位点(Watson et al. 2017)Fig. 1-2 Structure and phosphorylation sites of ATF2(Watson et al. 2017)

最基本、最普遍也是最重要的方式之一，它参与并调控生命活动的许多过程(Zolnierowicz S. and Bollen, M. 2000)。磷酸化修饰是蛋白质酯化的过程，磷酸化过程如示意图（图1-3）所示，通过在蛋白质氨基酸侧链加入带强负电的磷酸基团，在蛋白激酶的催化作用下将ATP或GTP的γ位磷酸基转移到被修饰蛋白质的氨基酸残基，如丝氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）和苏氨酸（Thr）等，改变蛋白质原本的构型，获得活性及与其他分子互作的能力(Cohen P.2002,Kim J. H. et al2004)。蛋白质组（proteome）最早由 Marc Wilkins 于 1996 年使用，它意指为一个细胞的总体蛋白质含量，是基因组的蛋白质补体(Wilkins M. R. et al 1996) 。生物体内基因的大部分功能信息都是以蛋白质组形式体现。蛋白质组学对于疾病的早期诊断、预防及病情发展的检测至关重要。此外

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病的诊断与防治[J]. 吴运谱.  现代畜牧兽医. 2013(08)
[2]伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施[J]. 童光志,陈焕春.  中国兽医学报. 1999(01)



本文编号：3626014