重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位对鸭的安全性研究

发布时间：2022-02-15 18:00

　　大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（E.coli heat-labile enterotoxin B subunit, LTB）能够与黏膜上皮细胞的神经节苷脂GM1受体结合,具有很强的免疫原性和免疫增强活性,是目前最受关注的黏膜免疫佐剂之一。在其从实验室走向产业化生产的过程中,重组LTB蛋白获得高效表达和通过生物安全性评价是其关键研发环节。本研究利用自动发酵罐培养重组毕赤酵母进行LTB表达。培养条件为温度30℃,pH 6.0,溶氧35%,氨水和2%蛋白胨为氮源,补入发酵液总体积1%的甲醇作为碳源。初始碳源消耗完后依据溶氧曲线的波动逐步增加甲醇的流加速度,使甲醇浓度维持在1.5%左右,诱导表达96 h,获得重组LTB的高效分泌表达。以硫酸铵沉淀和Ni2+螯合柱亲和层析等蛋白纯化方法,获得纯度高达98%的重组LTB蛋白。以变性和非变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）验证了重组LTB的五聚体结构；神经节苷脂GM1酶联免疫吸附（GM.1-ELISA）法检测结果表明,重组LTB具有与神经节苷脂GM1结合的生物活性。采用GM1-ELISA测定LTB注射后不同时间点鸭血清中的LTB含... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
上篇 文献综述
    第一章 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的研究进展
        1 LTB的结构及分子生物学特性
        2 LTB的表达系统研究进展
        3 LTB的免疫原性研究
        4 LTB的免疫应答及应用
        5 LTB的免疫调节机制
        6 LTB的佐剂作用及应用
        7 展望
        参考文献
    第二章 动物用基因工程制品的生物安全
        1 基因工程及基因工程制品
        2 生物安全的定义
        3 动物用基因工程制品的安全性
            3.1 对人类和动物健康的作用
            3.2 对生态环境的作用
        4 相关法律法规的制定
        5 基因工程佐剂制品的安全性评价
        6 结论
        参考文献
下篇 研究内容
    第三章 自动发酵罐批量生产重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 结果与分析
            3.1 重组LTB蛋白的酵母表达
            3.2 重组LTB蛋白的纯化
            3.4 纯化的重组LTB蛋白特性鉴定
        4 讨论
        参考文献
    第四章 重组LTB在鸭体内的消长动态及其对鸭免疫功能影响的研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 结果
            3.1 LTB在鸭体内的消长动态研究
            3.2 LTB对鸭免疫功能的影响
        4 讨论
            4.1 LTB在鸭体内的消长动态研究
            4.2 LTB对鸭免疫功能的影响
        参考文献
    第五章 LTB对鸭的安全性研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 结果
            3.1 LTB基因和抗性标记基因残留检测
            3.2 LTB诱发的免疫反应检测
            3.3 LTB对鸭的毒性作用研究
        4 讨论
        参考文献
全文总结
附录
致谢
在读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]过敏性肺炎[J]. 金贝贝,许文兵.  国际呼吸杂志. 2012 (10)
[2]大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的原核表达、纯化及其黏膜免疫佐剂作用[J]. 崔文禹,李媛媛,单璞,凌媛,李计来,徐静.  中国生物制品学杂志. 2011(12)
[3]狂犬病毒作为神经示踪剂的研究进展[J]. 宋艳,李宁,黄飞,单晶辉,张茂林,段铭,关振宏.  生物技术通报. 2011(05)
[4]酶联免疫法研究注射用重组人胸腺肽α1的猕猴药动学[J]. 蔡永明,陈拯民,孙超渊,刘昌孝.  药物评价研究. 2009(02)
[5]CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应[J]. 景志忠,蒙学莲,窦永喜,陈国华,房永祥,黄银君,王超英,刘西兰,张军,才学鹏.  畜牧兽医学报. 2009(06)
[6]大肠杆菌LTb蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[J]. 刘焕,王一成,袁秀芳,徐丽华.  浙江农业科学. 2008(05)
[7]农业生物技术的风险及其控制研究[J]. 李中东.  科技进步与对策. 2007(12)
[8]浅议我国生物安全的法律保障[J]. 黄锡生,张菱芷.  南方冶金学院学报. 2005(05)
[9]金属硫蛋白在仔猪体内代谢动力学研究[J]. 李丽立,张彬,印遇龙,李小龙,李光宪,侯振平.  核农学报. 2004(06)
[10]重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究[J]. 高志刚,邹全明,郭刚,郭桐生,曾韦锟,解庆华.  细胞与分子免疫学杂志. 2003(01)

硕士论文
[1]大肠杆菌LTB增强PRRSV-GP5蛋白免疫原性的研究[D]. 王朝文.甘肃农业大学 2010



本文编号：3627077