miR-19a靶向TBK1抑制NF-κB信号通路的研究
发布时间：2022-02-17 19:27
奶牛子宫内膜炎是常发的子宫组织炎症损伤,常由分娩损伤和细菌感染引起,可造成动物着床失败、流产乃至不孕,给养殖业带来了巨大的经济损失。由于该病的致病机理尚不明确,迄今为止还没有良好的子宫内膜炎治疗方法。目前,临床上主要通过抗微生物药物治疗子宫内膜炎,但是治疗过程中产生的抗生素残留及耐药菌又会导致严重的食品安全问题,因而其在许多国家已被禁用或严格限制使用。该病的发生不仅与致病因素有关,还与机体的自身免疫状态密切相关。最新研究显示,miRNAs可调控多种疾病的发生、发展和转归,其作用机理主要是通过与靶基因的3’-UTR结合而沉默基因的表达。miR-19a属于多顺反子miR-17-92簇,在结肠炎、肺炎、动脉粥样硬化以及多种癌症发病过程中发挥着重要作用。细菌内毒素如脂多糖（LPS）与细胞表面的模式识别受体4（TLR4）结合后可激活NF-κB通路,引起机体的炎性应答反应,促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6等的表达。本研究通过构建牛子宫内膜上皮细胞（bEECs）和小鼠子宫内膜炎症模型,探索miRNAs对子宫内膜炎症应答的调节作用,阐明子宫内膜炎的发生机制,为临床上治疗奶牛子宫内膜炎提供新...
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 前言
1.1 子宫内膜炎
1.1.1 子宫内膜炎的病因与危害
1.1.2 子宫内膜炎的症状
1.1.3 子宫内膜炎的诊断
1.1.4 子宫内膜炎的治疗与预防
1.2 miR-19a的研究进展
1.2.1 MicroRNAs
1.2.2 miR-19a
1.3 TBK1 的研究进展
1.4 NF-κB信号通路与炎症
1.5 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验仪器
2.1.3 主要试剂及耗材
2.1.4 实验相关溶液的配制
2.1.5 生物信息学分析相关软件及数据库
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠子宫内膜炎模型的建立
2.2.2 小鼠子宫组织病理学评估
2.2.3 牛子宫内膜上皮细胞的培养
2.2.4 miR-19a靶基因的预测与分析
2.2.5 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR双荧光素酶报告基因载体的构建
2.2.6 双荧光素酶报告基因的检测
2.2.7 细胞炎症模型的建立
2.2.8 miR-19a mimics和 inhibitor的转染
2.2.9 siRNA的转染
2.2.10 qPCR对 miRNA及相关基因表达的分析
2.2.11 Western blot对蛋白表达情况的检测
2.2.12 ELISA对炎性因子表达量的检测
2.2.13 免疫荧光技术
2.2.14 数据统计与处理
3 结果与分析
3.1 小鼠子宫内膜炎模型的鉴定
3.1.1 组织病理学观察
3.1.2 LPS对 TLR4 表达的影响
3.1.3 LPS对组织中炎性因子表达水平的影响
3.2 miR-19a在小鼠子宫中的表达分析
3.3 miR-19a在 bEECs中的表达分析
3.3.1 LPS对 bEECs活力的影响
3.3.2 miR-19a在 LPS刺激的bEECs中的表达改变
3.4 miR-19a在 LPS诱导的bEECs炎症中的作用
3.4.1 miR-19a mimics转染效率的检测
3.4.2 miR-19a对炎性因子表达的影响
3.4.3 miR-19a对 TLR4/NF-κB信号通路的影响
3.5 miR-19a靶基因的预测与验证
3.5.1 靶基因的预测与分析
3.5.2 miR-19a与 TBK1 表达量的相关性分析
3.5.3 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR载体的成功构建
3.5.4 双荧光素酶实验对靶基因的验证
3.6 siRNA干扰TBK1 在细胞中的功能研究
3.6.1 最佳siRNA的筛选
3.6.2 siRNA对 TBK1 的沉默效果
3.6.3 siRNA沉默TBK1 对炎性因子表达的影响
3.6.4 siRNA沉默TBK1对NF-κB信号通路的作用
4 讨论
4.1 miR-19a与炎症
4.2 研究展望
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛子宫内膜炎病因学研究进展[J]. 那立冬,王东升,董书伟,张世栋,闫宝琪,杨洪早,桑梦琪,严作廷. 动物医学进展. 2016(09)
[2]母牛子宫内膜炎的诊断与治疗[J]. 贾琼,吕桂英,姜科,孙国栋. 黑龙江动物繁殖. 2011(06)
[3]奶牛子宫内膜炎的病因与综合防制[J]. 梁书文. 中国畜牧兽医. 2011(03)
[4]奶牛子宫内膜炎生物制剂防治[J]. 史同瑞,王岩,刘宇,李丹. 中国动物保健. 2011(02)
[5]中药治疗奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 王洪海,王国卿,郭梦尧,张乃生. 中国兽医杂志. 2010(08)
[6]奶牛子宫内膜炎诊疗与防治[J]. 王永生,吴艳丽. 中国牛业科学. 2010(01)
[7]miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控[J]. 张振武,安洋,滕春波. 遗传. 2009(11)
[8]奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 马成松,张生祥. 畜牧兽医科技信息. 2009(06)
[9]奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 许腊梅,冯万宇,王岩,王志明,段莹莹,侯振中. 动物医学进展. 2008(08)
[10]奶牛子宫内膜炎的临床症状与防治措施[J]. 于永胜,毕胜,赵海君. 畜牧兽医科技信息. 2008(06)
硕士论文
[1]IFN-tau通过NF-κB信号转导通路调节金葡菌诱导的小鼠子宫内膜炎症的应答[D]. 陈秀英.华中农业大学 2017
[2]规模化奶牛养殖场奶牛难产的病因分析与处置[D]. 周旭东.西北农林科技大学 2014
本文编号：3629977
【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 前言
1.1 子宫内膜炎
1.1.1 子宫内膜炎的病因与危害
1.1.2 子宫内膜炎的症状
1.1.3 子宫内膜炎的诊断
1.1.4 子宫内膜炎的治疗与预防
1.2 miR-19a的研究进展
1.2.1 MicroRNAs
1.2.2 miR-19a
1.3 TBK1 的研究进展
1.4 NF-κB信号通路与炎症
1.5 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 实验仪器
2.1.3 主要试剂及耗材
2.1.4 实验相关溶液的配制
2.1.5 生物信息学分析相关软件及数据库
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠子宫内膜炎模型的建立
2.2.2 小鼠子宫组织病理学评估
2.2.3 牛子宫内膜上皮细胞的培养
2.2.4 miR-19a靶基因的预测与分析
2.2.5 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR双荧光素酶报告基因载体的构建
2.2.6 双荧光素酶报告基因的检测
2.2.7 细胞炎症模型的建立
2.2.8 miR-19a mimics和 inhibitor的转染
2.2.9 siRNA的转染
2.2.10 qPCR对 miRNA及相关基因表达的分析
2.2.11 Western blot对蛋白表达情况的检测
2.2.12 ELISA对炎性因子表达量的检测
2.2.13 免疫荧光技术
2.2.14 数据统计与处理
3 结果与分析
3.1 小鼠子宫内膜炎模型的鉴定
3.1.1 组织病理学观察
3.1.2 LPS对 TLR4 表达的影响
3.1.3 LPS对组织中炎性因子表达水平的影响
3.2 miR-19a在小鼠子宫中的表达分析
3.3 miR-19a在 bEECs中的表达分析
3.3.1 LPS对 bEECs活力的影响
3.3.2 miR-19a在 LPS刺激的bEECs中的表达改变
3.4 miR-19a在 LPS诱导的bEECs炎症中的作用
3.4.1 miR-19a mimics转染效率的检测
3.4.2 miR-19a对炎性因子表达的影响
3.4.3 miR-19a对 TLR4/NF-κB信号通路的影响
3.5 miR-19a靶基因的预测与验证
3.5.1 靶基因的预测与分析
3.5.2 miR-19a与 TBK1 表达量的相关性分析
3.5.3 TBK13'-UTR和 Mut-TBK13'-UTR载体的成功构建
3.5.4 双荧光素酶实验对靶基因的验证
3.6 siRNA干扰TBK1 在细胞中的功能研究
3.6.1 最佳siRNA的筛选
3.6.2 siRNA对 TBK1 的沉默效果
3.6.3 siRNA沉默TBK1 对炎性因子表达的影响
3.6.4 siRNA沉默TBK1对NF-κB信号通路的作用
4 讨论
4.1 miR-19a与炎症
4.2 研究展望
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛子宫内膜炎病因学研究进展[J]. 那立冬,王东升,董书伟,张世栋,闫宝琪,杨洪早,桑梦琪,严作廷. 动物医学进展. 2016(09)
[2]母牛子宫内膜炎的诊断与治疗[J]. 贾琼,吕桂英,姜科,孙国栋. 黑龙江动物繁殖. 2011(06)
[3]奶牛子宫内膜炎的病因与综合防制[J]. 梁书文. 中国畜牧兽医. 2011(03)
[4]奶牛子宫内膜炎生物制剂防治[J]. 史同瑞,王岩,刘宇,李丹. 中国动物保健. 2011(02)
[5]中药治疗奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 王洪海,王国卿,郭梦尧,张乃生. 中国兽医杂志. 2010(08)
[6]奶牛子宫内膜炎诊疗与防治[J]. 王永生,吴艳丽. 中国牛业科学. 2010(01)
[7]miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控[J]. 张振武,安洋,滕春波. 遗传. 2009(11)
[8]奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 马成松,张生祥. 畜牧兽医科技信息. 2009(06)
[9]奶牛子宫内膜炎研究进展[J]. 许腊梅,冯万宇,王岩,王志明,段莹莹,侯振中. 动物医学进展. 2008(08)
[10]奶牛子宫内膜炎的临床症状与防治措施[J]. 于永胜,毕胜,赵海君. 畜牧兽医科技信息. 2008(06)
硕士论文
[1]IFN-tau通过NF-κB信号转导通路调节金葡菌诱导的小鼠子宫内膜炎症的应答[D]. 陈秀英.华中农业大学 2017
[2]规模化奶牛养殖场奶牛难产的病因分析与处置[D]. 周旭东.西北农林科技大学 2014
本文编号：3629977
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3629977.html
