SUV39H1/H2基因表达抑制对猪体细胞克隆胚胎发育潜能影响的初步研究

发布时间：2022-02-17 20:00

　　体细胞克隆效率主要取决于供体细胞核是否被完全重编程,而供体细胞重编程涉及去除表观遗传标记,将其逆转为未分化的状态,获得可重新分化成各种类型细胞的能力[1]。组蛋白3第9位赖氨酸三甲基化（H3K9me3）依赖的异染色质是体细胞发生完全重编程的重大障碍[2]。花斑抑制因子同源物（suppressor of variegation3-9 homologl/2, SUV39H1/2）基因编码特异性催化H3K9me3形成的组蛋白甲基化转移酶,促进染色质浓缩形成异染色质,调控基因转录。为了探究SUV39H1/H2基因在体细胞重编程过程中的作用,本研究采用RNA干扰（RNAi）技术抑制德保猪耳成纤维细胞SUV39H1/H2基因表达,并以之为核供体,探究对猪体细胞核移植早期胚胎发育潜能的影响。以探索提高克隆胚胎发育潜能及克隆动物生产效率新途径。一、 SUV39H1/H2基因表达载体构建及其shRNA干扰效率验证1.为了获得具有显著抑制SUV39H1/H2基因表达的shRNA片段,本试验首先克隆获得德保猪SUV39H1基因第二外显子和SUV39H2基因完整的ORF序列,分别构建其真核表达载体并在293T... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区211工程院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一部分 文献综述
    第一章 体细胞表观重编程的研究进展
        1 DNA甲基化与体细胞重编程
        2 组蛋白乙酰化与体细胞重编程
        3 组蛋白甲基化与体细胞重编程
            3.1 组蛋白甲基化概述
            3.2 H3K4me3调控基因转录及胚胎发育
            3.3 H3K27me3调控基因转录及胚胎发育
        4 H3K9甲基化与体细胞重编程
            4.1 H3K9甲基化转移酶与去甲基化酶
            4.2 H3K9甲基化与胚胎发育
            4.3 H3K9me3与体细胞重编程
研究目的与意义
第二部分 实验研究
    第二章 猪SUV39H1/H2基因表达载体构建及其SHRNA干扰效率验证
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 德保猪SUV39H1/H2基因克隆及序列分析
            2.2 德保猪SUV39H1/H2基因真核表达载体构建
            2.3 德保猪SUV39H1/H2基因真核表达载体转染293T细胞
            2.4 SUV39H1 shRNA抑制效率验证
            2.5 SUV39H2 shRNA抑制效率验证
        3 分析与讨论
        4 小结
    第三章 SUV39H1/H2基因表达抑制对猪成纤维细胞生长与增殖的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 SUV39H1/H2基因shRNA慢病毒包装及滴度测定
            2.2 SUV39H1/H2基因表达抑制对德保猪耳缘成纤维细胞生长的影响
            2.3 SUV39H1/H2基因表达抑制对德保猪耳成纤维细胞H3K9me3水平的影响
            2.4 SUV39H1/H2基因表达抑制对细胞表观修饰及细胞周期蛋白相关基因表达的影响
        3 分析与讨论
        4 小结
    第四章 SUV39H1/H2基因表达抑制对猪体细胞核移植胚胎发育的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 H3K9me3在猪植入前胚胎中的表达
            2.2 SUV39H1/H2、SETDB1、KDM4D基因在猪早期胚胎中的表达
            2.3 SUV39H1/H2基因表达抑制对猪核移植胚胎发育的影响
        3 分析讨论
        4 小结
总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]The Epigenetic Reprogramming Roadmap in Generation of iPSCs from Somatic Cells[J]. Jacob Brix,Yan Zhou,Yonglun Luo.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(12)
[2]细胞周期调控的研究进展[J]. 高燕,林莉萍,丁健.  生命科学. 2005(04)

博士论文
[1]猪卵胞质注射及单精子胞质内注射介导的转基因方法研究[D]. 刘帅.广西大学 2015

硕士论文
[1]水牛SUV39H1基因shRNA片段的筛选及对外源转基因表达效率的影响[D]. 林浪.广西大学 2013
[2]YY1基因对水牛植入前胚胎DNA甲基化影响的初步研究[D]. 龚云.广西大学 2013
[3]水牛CD14基因shRNA片段的筛选及其对相关基因表达的影响研究[D]. 李美青.广西大学 2012



本文编号：3630022