牛ATGL基因对牛脂肪细胞中甘油三酯积累的调控作用研究
发布时间：2022-02-19 00:37
牛肉中的肌内脂肪含量可以直接影响了牛肉嫩度和风味，增加牛肉中肌内脂肪含量可以改善牛肉的品质。而机体脂肪组织含量又是脂肪细胞中甘油三酯积累量的宏观体现。此外，研究发现动物脂肪的沉积与脂肪代谢是受多种转录因子调控的复杂生理过程。脂肪细胞甘油三酯水解酶（adipose triglyceride lipase，ATGL）可以特异性的脂解甘油三酯，并将甘油三酯水解为甘油二酯，是调控细胞中甘油三酯和脂肪酸之间平衡的关键因子。目前，关于ATGL对牛前体脂肪细胞中的甘油三脂积累影响及其调控机理仍不清楚。为了探索牛ATGL基因的功能，本研究以牛ATGL基因为目标基因，以牛前体脂肪细胞为实验对象，以腺病毒介导的基因过量表达技术和shRNA干扰技术为手段，直接发掘牛GL基因在牛前体脂肪细胞甘油三脂积累过程中的重要作用。同时，在转录水平上初步探索目标基因对一些重要的脂肪细胞分化、脂肪合成及代谢相关基因的影响。主要研究成果如下：（1）克隆得到秦川牛ATGL基因的CDS区序列，并研究了其在牛脂肪细胞诱导分化过程中的mRNA表达规律。（2）构建了牛ATGL基因的腺病毒过表达载体，并包装获得了高滴度重组腺病毒，建立了...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 研究背景
1.2 脂肪组织和脂肪细胞的分化研究进展
1.2.1 脂肪组织的分类
1.2.2 脂肪细胞增殖与分化
1.3 脂肪细胞甘油三脂脂解的研究进展
1.3.1 脂肪酶与甘油三酯水解
1.3.2 PAT 家族蛋白与甘油三酯水解
1.3.3 调控甘油三酯水解的主要通路
1.4 表达载体系统研究进展
1.4.1 非病毒表达载体系统
1.4.2 病毒表达载体系统
1.5 RNA 干扰研究进展
1.6 本研究的目标、意义和内容
1.6.1 研究目标和意义
1.6.2 研究内容
第二章 牛 ATGL 基因在牛脂肪细胞分化过程的中基因表达规律研究
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验方法
2.2 结果
2.2.1 牛前体脂肪细胞形态学观察
2.2.2 油红 O 染色结果
2.2.3 Real-Time PCR 引物检测
2.2.4 ATGL 基因在脂肪细胞不同时间段的表达规律
2.3 讨论
第三章 牛 ATGL 基因重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.2 结果
3.2.1 ATGL 过表达载体的构建与鉴定
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 牛 ATGL 基因 shRNA 序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 shRNA 检测及 pENTR-U6-shRNA 表达载体构建
4.2.2 Ad-shRNA 病毒重组子的构建及鉴定
4.2.3 Ad-shRNA 腺病毒的包装、扩增及滴度测定
4.2.4 AD-shRNA 病毒有效性鉴定和筛选
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 牛 ATGL 基因对牛脂肪细胞中甘油三脂积累的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.2 结果
5.2.1 Real-time PCR 引物检测
5.2.2 ATGL 重组腺病毒表达载体和干扰载体侵染和细胞形态学观察
5.2.3 ATGL 腺病毒处理后甘油三脂检测
5.2.4 脂肪细胞分化相关基因的 mRNA 表达情况
5.2.5 脂肪合成相关基因的 mRNA 表达情况
5.2.6 脂肪代谢相关基因的 mRNA 表达情况
5.3 讨论
5.3.1 下调 ATGL 表达量使脂肪细胞中甘油三酯的量增多、脂滴变明显
5.3.2 上调 ATGL 表达量使脂肪细胞中甘油三酯的量减少、脂滴数目变少
5.3.3 牛 ATGL 基因对脂肪细胞分化相关基因的调控作用分析
5.3.4 牛 ATGL 基因对脂肪合成与代谢相关基因的调控作用分析
5.4 小结
第六章 结论
6.1 实验结论
6.2 创新点
参考文献
附录
致谢
作者简介
个人基本情况
学习经历
攻读博士学位期间发表文章情况
攻读博士学位期间获奖情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊LXRα基因shRNA序列的筛选及腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 钟瑜,罗军,王维,胡仕良,李君,孙雨婷,郝娟,石恒波. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(11)
[2]siRNA特异性抑制犊牛原代肝细胞SREBP-1c基因的表达[J]. 邓清华,付世新,刘国文,刘磊,王建国,白鸽,朱晓岩,李慧萍,李小兵,王哲. 中国兽医学报. 2011(07)
[3]脂肪组织源性干细胞分步诱导分化为神经元样细胞[J]. 陈盼盼,张丽华,董为人,刘杰明,张易,乔伟光,陈英华,赵姝,郭家松. 南方医科大学学报. 2011(03)
[4]转录因子CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）的研究进展[J]. 高运臻,潘玉春. 遗传. 2011(03)
[5]加强科技创新,促进我国肉牛种业建设[J]. 昝林森. 中国牛业科学. 2011(01)
[6]西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建[J]. 王伟,罗军,赵旺生,李建华,张晓,王龙坛. 西北农业学报. 2010(03)
[7]原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中基因表达和脂肪因子分泌的特征[J]. 黎明,阴津华,张葵,吴从愿,邓洁英. 中华内分泌代谢杂志. 2010 (01)
[8]中国肉牛产业现状、热点透析与发展趋势及对策[J]. 昝林森,赵春平,刘扬,刘永峰. 中国农业科技导报. 2009(05)
[9]腺病毒表达载体对骨髓间充质干细胞分化能力的影响[J]. 单志新,林秋雄,李晓红,邓春玉,周志凌,黄薇,黄晓忠,余细勇. 南方医科大学学报. 2008(07)
[10]曲格列酮对人前脂肪细胞增殖和分化的影响[J]. 宋彬,杨静. 山西医科大学学报. 2007(10)
本文编号：3631851
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 研究背景
1.2 脂肪组织和脂肪细胞的分化研究进展
1.2.1 脂肪组织的分类
1.2.2 脂肪细胞增殖与分化
1.3 脂肪细胞甘油三脂脂解的研究进展
1.3.1 脂肪酶与甘油三酯水解
1.3.2 PAT 家族蛋白与甘油三酯水解
1.3.3 调控甘油三酯水解的主要通路
1.4 表达载体系统研究进展
1.4.1 非病毒表达载体系统
1.4.2 病毒表达载体系统
1.5 RNA 干扰研究进展
1.6 本研究的目标、意义和内容
1.6.1 研究目标和意义
1.6.2 研究内容
第二章 牛 ATGL 基因在牛脂肪细胞分化过程的中基因表达规律研究
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验方法
2.2 结果
2.2.1 牛前体脂肪细胞形态学观察
2.2.2 油红 O 染色结果
2.2.3 Real-Time PCR 引物检测
2.2.4 ATGL 基因在脂肪细胞不同时间段的表达规律
2.3 讨论
第三章 牛 ATGL 基因重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.2 结果
3.2.1 ATGL 过表达载体的构建与鉴定
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 牛 ATGL 基因 shRNA 序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 shRNA 检测及 pENTR-U6-shRNA 表达载体构建
4.2.2 Ad-shRNA 病毒重组子的构建及鉴定
4.2.3 Ad-shRNA 腺病毒的包装、扩增及滴度测定
4.2.4 AD-shRNA 病毒有效性鉴定和筛选
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 牛 ATGL 基因对牛脂肪细胞中甘油三脂积累的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.2 结果
5.2.1 Real-time PCR 引物检测
5.2.2 ATGL 重组腺病毒表达载体和干扰载体侵染和细胞形态学观察
5.2.3 ATGL 腺病毒处理后甘油三脂检测
5.2.4 脂肪细胞分化相关基因的 mRNA 表达情况
5.2.5 脂肪合成相关基因的 mRNA 表达情况
5.2.6 脂肪代谢相关基因的 mRNA 表达情况
5.3 讨论
5.3.1 下调 ATGL 表达量使脂肪细胞中甘油三酯的量增多、脂滴变明显
5.3.2 上调 ATGL 表达量使脂肪细胞中甘油三酯的量减少、脂滴数目变少
5.3.3 牛 ATGL 基因对脂肪细胞分化相关基因的调控作用分析
5.3.4 牛 ATGL 基因对脂肪合成与代谢相关基因的调控作用分析
5.4 小结
第六章 结论
6.1 实验结论
6.2 创新点
参考文献
附录
致谢
作者简介
个人基本情况
学习经历
攻读博士学位期间发表文章情况
攻读博士学位期间获奖情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊LXRα基因shRNA序列的筛选及腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 钟瑜,罗军,王维,胡仕良,李君,孙雨婷,郝娟,石恒波. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(11)
[2]siRNA特异性抑制犊牛原代肝细胞SREBP-1c基因的表达[J]. 邓清华,付世新,刘国文,刘磊,王建国,白鸽,朱晓岩,李慧萍,李小兵,王哲. 中国兽医学报. 2011(07)
[3]脂肪组织源性干细胞分步诱导分化为神经元样细胞[J]. 陈盼盼,张丽华,董为人,刘杰明,张易,乔伟光,陈英华,赵姝,郭家松. 南方医科大学学报. 2011(03)
[4]转录因子CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）的研究进展[J]. 高运臻,潘玉春. 遗传. 2011(03)
[5]加强科技创新,促进我国肉牛种业建设[J]. 昝林森. 中国牛业科学. 2011(01)
[6]西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建[J]. 王伟,罗军,赵旺生,李建华,张晓,王龙坛. 西北农业学报. 2010(03)
[7]原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中基因表达和脂肪因子分泌的特征[J]. 黎明,阴津华,张葵,吴从愿,邓洁英. 中华内分泌代谢杂志. 2010 (01)
[8]中国肉牛产业现状、热点透析与发展趋势及对策[J]. 昝林森,赵春平,刘扬,刘永峰. 中国农业科技导报. 2009(05)
[9]腺病毒表达载体对骨髓间充质干细胞分化能力的影响[J]. 单志新,林秋雄,李晓红,邓春玉,周志凌,黄薇,黄晓忠,余细勇. 南方医科大学学报. 2008(07)
[10]曲格列酮对人前脂肪细胞增殖和分化的影响[J]. 宋彬,杨静. 山西医科大学学报. 2007(10)
本文编号：3631851
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3631851.html
