谷氨酰胺对PCV2在PK15细胞中复制的影响及其机理研究

发布时间：2022-02-19 11:44

　　PCV2是目前猪场中普遍存在的一种病原,可以引起多种猪圆环病毒病,如断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、仔猪先天性震颤（CT）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、猪增生性坏死性肺炎（PNP）和繁殖障碍等,其中最为严重的是PMWS,给世界养猪业造成了巨大的经济损失,对PMWS的防治越来越引起人们的关注。谷氨酰胺是哺乳动物体内含量最丰富的游离氨基酸,可以作为氧化燃料,为糖异生和脂肪合成提供前体,在基因和蛋白表达等方面起到调节作用。谷氨酰胺还可以影响病毒的感染和复制,人巨细胞病毒（HCMV）感染需要依赖于谷氨酰胺,在无谷氨酰胺的培养基中不能产生感染的病毒粒子,在缺乏谷氨酰胺培养的仓鼠肾细胞（BHK）细胞中,日本血球凝集病毒（HJV）的释放和包膜蛋白的合成被明显抑制,但水疱性口炎病毒（VSV）和新城疫病毒（NDV）的生长不受谷氨酰胺的影响。目前尚无有关谷氨酰胺对PCV2体外感染复制的研究报道。本论文主要研究了谷氨酰胺对PCV2在PK15细胞中复制的影响及其机理,为谷氨酰胺在细胞培养上的应用和PCV2的体外增殖提供理论参考。试验一:谷氨酰胺对PK15细胞增殖和PC... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
符号与缩略语
前言
第一部分 文献综述
    第一章 猪圆环病毒2型(PCV2)研究进展
        1 生物学特性
            1.1 病原学
            1.2 基因结构
            1.3 复制和转录
            1.4 细胞培养特性
        2 流行病学
        3 PCV2相关疾病
            3.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)
            3.2 猪皮炎与肾病综合症(PDNS)
            3.3 繁殖障碍
            3.4 仔猪先天性震颤(CT)
            3.5 猪呼吸道疾病综合征(PRDC)
            3.6 猪增生性坏死性肺炎(PNP)
        4 猪圆环病毒病的诊断
        5 猪圆环病毒病的防治
            5.1 加强饲养管理
            5.2 生物安全强化
            5.3 控制营养结构
            5.4 控制混合感染
            5.5 合理治疗与免疫
            5.6 实施严格的引进及繁育管理
        参考文献
    第二章 谷氨酰胺研究进展
        1 谷氨酰胺的理化性质
        2 谷氨酰胺的代谢
            2.1 肠道
            2.2 骨骼肌
            2.3 肝脏
            2.4 细胞培养
        3 谷氨酰胺的营养作用
        4 谷氨酰胺的抗氧化作用
        5 谷氨酰胺与免疫
        6 谷氨酰胺与病毒感染
        7 谷氨酰胺的应用
        参考文献
第二部分 试验研究
    第三章 谷氨酰胺对PCV2在PK15中复制的影响
        1 材料与方法
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂和材料
            1.3 细胞传代和病毒培养
            1.4 MTT法测定细胞增殖
            1.5 病毒总DNA提取
            1.6 实时荧光定量PCR测定PCV2 DNA拷贝数
            1.7 间接免疫荧光检测PCV2阳性细胞感染率
            1.8 数据分析
        2 结果
            2.1 不同浓度谷氨酰胺对PK15细胞增殖的影响
            2.2 PCV2在正常培养基和无谷氨酰胺培养基中的复制
            2.3 不同浓度谷氨酰胺对PCV2在PK15细胞中感染复制的影响
        3 讨论
        参考文献
    第四章 谷氨酰胺影响PCV2复制的机理研究
        1 材料与方法
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂和材料
            1.3 细胞传代和病毒培养
            1.4 试验设计
            1.5 细胞内GSH、SOD和MDA的测定
            1.6 实时荧光定量PCR测定PCV2 DNA拷贝数
            1.7 间接免疫荧光检测PCV2阳性细胞感染率
            1.8 荧光定量PCR检测p38 mRNA的表达
            1.9 Western blot检测p38磷酸化水平
            1.10 数据分析
        2 结果
            2.1 降低谷氨酰胺浓度对PK15细胞抗氧化能力的影响
            2.2 降低谷氨酰胺浓度对PCV2复制的影响
            2.3 降低谷氨酰胺浓度对PCV2感染细胞中p38 MAPK的影响
            2.4 不同处理对病毒感染细胞内GSH水平的影响
            2.5 不同处理对PCV2复制的影响
            2.6 不同处理对细胞p38蛋白表达的影响
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒病及其生物制品学的研究进展[J]. 郎洪武,陈晓春,吴华伟,邓永,高金源,杨汉春.  中国兽医科学. 2012(05)
[2]病毒感染与氧化应激的关系[J]. 施志慧,史训龙,朱海燕,周珮.  复旦学报(医学版). 2012(01)
[3]精氨酸和谷氨酰胺对猪小肠上皮细胞增殖的影响及机理探讨[J]. 聂新志,蒋宗勇,林映才,郑春田,周桂莲,汪仕奎,王丽.  中国农学通报. 2012(02)
[4]浅谈仔猪PMWS的认识及防控策略[J]. 吴舒渊.  中国畜禽种业. 2011(12)
[5]猪圆环病毒病的流行病学调查[J]. 廖荣斌,赵洪翠,李文涛,肖文,刘英玉,刘晓丽,李庆,王雷,何启盖.  养猪. 2011(01)
[6]猪圆环病毒感染相关疾病及防控措施[J]. 陈洁,金尔光,郭一,叶胜强,钱运国,童伟文,鲍伯胜.  现代农业科技. 2010(21)
[7]猪圆环病毒病（PCVD）研究进展[J]. 宋长绪,梁鹏帅.  广东农业科学. 2010(09)
[8]谷氨酰胺对免疫功能的影响[J]. 李宁,赖万强.  医学综述. 2010(06)
[9]谷氨酰胺生理功能与应用研究进展[J]. 王书平,刘俊华.  安徽农业科学. 2009(22)
[10]p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展[J]. 王国军,刘亚伟,李玉花,姜勇.  生物技术通讯. 2009(03)

博士论文
[1]谷氨酰胺对早期断奶仔猪肠道营养与免疫功能影响机理的研究[D]. 刘涛.华中农业大学 2002
[2]谷氨酰胺对早期断奶仔猪肠道的保护作用及其机理研究[D]. 张军民.中国农业科学院 2000

硕士论文
[1]谷胱甘肽纳米脂质体的研制[D]. 王祥.江南大学 2008
[2]PCV-2感染仔猪的病理学变化及淋巴结细胞凋亡的研究[D]. 施旅娟.南京农业大学 2006
[3]仔猪断奶后多系统衰竭综合征防治技术研究[D]. 胡兴海.南京农业大学 2005
[4]谷氨酰胺的抗动物应激研究[D]. 谢新民.南京农业大学 2003



本文编号：3632838