原核表达猪IFN-γ抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制及相关机制的研究

发布时间：2022-02-19 13:38

　　猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus）引起的一种高传染性的猪肠道疾病,具有很高的发病率和死亡率。TGEV可感染任何日龄猪,主要感染新生仔猪造成仔猪的急性腹泻。虽然市场上有较多的疫苗用于TGEV的预防,但是目前还没有有效的制剂能够治疗TGEV的感染,本研究通过猪IFN-γ（Interferon-γ,IFN-γ）的原核表达进行猪IFN-γ抗TGEV活性和相关机制的研究。IFN-γ主要具有调节宿主免疫应答的能力,但是其最初被发现是由于具有抗病毒活性,而目前IFN-γ在抑制TGEV感染中的功能知之甚少。本研究使用大肠杆菌原核表达系统进行IFN-γ的表达纯化,该系统具有易于操作,生产量大,速度快,成本低等优点,目前是一种应用最广泛的表达系统。本研究首先将优化的Fc片段克隆至原核表达载体pET-21b中获得pET-21b-Fc重组载体,然后将IFN-γ克隆连接至pET-21b-Fc载体中,成功获得重组质粒pET-21b-IFN-γ-Fc,将其转化到E.col... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 猪传染性胃肠炎病毒
        1.1.1 猪传染性胃肠炎生物学概况
        1.1.2 猪传染性胃肠炎的预防和治疗
    1.2 干扰素抗病毒的研究进展
        1.2.1 干扰素简介
        1.2.2 干扰素抗病毒研究
    1.3 研究目的和意义
第二章 猪IFN-γ的原核表达及抗病毒活性的鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞，毒株
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验设备和耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 原核表达质粒pET-21b-IFN-γ-Fc的构建
        2.2.2 原核表达质粒pET-21b-IFN-γ-Fc的诱导表达
        2.2.3 细胞毒性实验
    2.3 实验结果
        2.3.1 原核表达质粒pET-21b-IFN-γ-Fc的构建
        2.3.2 重组表达质粒pET-21b-IFN-γ-Fc的诱导表达与鉴定
        2.3.3 重组蛋白IFN-γ细胞毒性实验
        2.3.4 重组表达质粒pET-21b-IFN-γ-Fc抗病毒蛋白活性检测
    2.4 讨论
第三章 IFN-γ抗猪传染性胃肠炎病毒复制及相关机制研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞，毒株和动物
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验设备和耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 细胞总RNA的提取及反转录
        3.2.3 荧光定量PCR（qPCR）
        3.2.4 PBMC分离
        3.2.5 间接免疫荧光
        3.2.6 质粒转染
        3.2.7 TCID50检测
        3.2.8 数据统计
    3.3 实验结果
        3.3.1 IFN-γ抑制TGEV在ST细胞和IPEC- J2细胞中的复制
        3.3.2 IRF1对TGEV复制的影响
        3.3.3 IFN-γ诱导poIRF1的表达
        3.3.4 TGEV感染在体内诱导IFN-γ和poIRF1的表达
        3.3.5 猪IRF1（poIRF1）在IFN-γ介导信号通路中的影响
        3.3.6 IFN-γ抑制TGEV通过激活IRF-1 信号通路
        3.3.7 IFN-γ对TGEV感染的抑制不完全依赖I型IFN
        3.3.8 IFN-γ诱导I型干扰素的表达
        3.3.9 IFN-γ与IFN-α协同抑制TGEV的复制
    3.4 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3632998