长链非编码RNA-MEG3对小鼠肌肉发育调控机制的研究
发布时间：2022-02-20 10:19
产肉品质一直是我国家畜生产的重要经济指标,而肌纤维作为构成肌肉的基本单位与肉品质有着密切的联系。肌纤维是由单核肌细胞向多核肌细胞融合最终形成的,因此研究肌细胞分子发育机制对于改善肌肉品质有重要意义。继发现microRNA参与多种调节机制后,另一种新型RNA-长链非编码RNA （LncRNA）开始进入人们视角,研究表明,它的调控机制比microRNA更加多样和复杂,参与的调控范围也更加广泛。在整个基因组中长链非编码RNA （LncRNA）大量存在,编码蛋白的基因只占很少的一部分,这也间接说明大量的LncRNA是以非编码的形式发挥对编码蛋白基因的调控。目前,针对LncRNA-Meg3（maternally expressed3）的研究主要集中在肿瘤中,研究表明,该基因表达量的增加能有效抑制癌细胞增殖,但Meg3基因对肌细胞的影响还没有相关报道。虽然对LncRNA的研究日益增多,但是相关的机制仍不是很清楚,因此,研究LncRNA具体的功能机制就显得尤为重要。本文采用注射蛇毒的方法构建肌肉损伤模型,通过组织切片和real time PCR对肌肉的修复过程进行分析。由于转录本数量过多,所以针对不...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 骨骼肌生长发育的研究现状
1.1.1 骨骼肌生长发育概述
1.1.2 参与调控肌肉发育的重要基因
1.2 IncRNA的简介
1.2.1 LncRNA概述
1.2.2 LncRNA生物学功能
1.2.2.1 LncRNA参与染色体重塑
1.2.2.2 LncRNA参与转录调节
1.2.3 LncRNA与疾病
1.2.3.1 与肿瘤相关的LncRNA
1.2.3.2 与神经系统疾病相关的LncRNA
1.3 LncRNA-Meg3的简介
1.3.1 LncRNA-Meg3的概述
1.3.2 LncRNA-Meg3的研究进展
1.4 非编码RNA在肌肉发育中的研究进展
1.5 本研究的技术路线和目的、意义
1.5.1 本实验的技术路线
1.5.2 研究目的与意义
第二章 小鼠肌肉损伤与肌肉重建的分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物及样品
2.1.2 主要仪器和设备
2.1.3 主要试剂耗材
2.1.4 所用引物序列
2.2 实验方法
2.2.1 样品准备及采集
2.2.2 HE染色石蜡切片制作
2.2.3 组织RNA提取、纯化及反转录
2.2.4 荧光定量PCR
2.3 结果与分析
2.3.1 小鼠肌肉损伤切片结果分析
2.3.2 定量结果分析
2.4 讨论
第三章 LncRNA-Meg3的鉴定与分子功能的分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验样品
3.1.2 主要仪器和设备
3.1.3 主要试剂和耗材
3.1.4 所用引物序列
3.2 实验方法
3.2.1 样品准备
3.2.2 核心转录本筛选确定
3.2.3 过表达载体构建
3.2.4 敲低片段设计
3.2.5 细胞转染
3.3 实验结果
3.4 讨论
第四章 LncRNA-Meg3在肌肉发育中功能初步分析
4.1 实验材料
4.1.1 细胞样品准备
4.1.2 主要仪器和设备
4.1.3 主要试剂和耗材
4.1.4 所用引物序列
4.2 实验方法
4.2.1 细胞样品培养
4.2.2 目的片段准备
4.2.3 体外转录
4.2.4 FISH原位杂交
4.2.5 Pulldown调取相关蛋白
4.2.6 Pulldown调取相关蛋白
4.3 结果与分析
4.4 讨论
第五章 小结
5.1 本研究的主要结论
5.2 下一步研究计划
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3634839
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 骨骼肌生长发育的研究现状
1.1.1 骨骼肌生长发育概述
1.1.2 参与调控肌肉发育的重要基因
1.2 IncRNA的简介
1.2.1 LncRNA概述
1.2.2 LncRNA生物学功能
1.2.2.1 LncRNA参与染色体重塑
1.2.2.2 LncRNA参与转录调节
1.2.3 LncRNA与疾病
1.2.3.1 与肿瘤相关的LncRNA
1.2.3.2 与神经系统疾病相关的LncRNA
1.3 LncRNA-Meg3的简介
1.3.1 LncRNA-Meg3的概述
1.3.2 LncRNA-Meg3的研究进展
1.4 非编码RNA在肌肉发育中的研究进展
1.5 本研究的技术路线和目的、意义
1.5.1 本实验的技术路线
1.5.2 研究目的与意义
第二章 小鼠肌肉损伤与肌肉重建的分析
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物及样品
2.1.2 主要仪器和设备
2.1.3 主要试剂耗材
2.1.4 所用引物序列
2.2 实验方法
2.2.1 样品准备及采集
2.2.2 HE染色石蜡切片制作
2.2.3 组织RNA提取、纯化及反转录
2.2.4 荧光定量PCR
2.3 结果与分析
2.3.1 小鼠肌肉损伤切片结果分析
2.3.2 定量结果分析
2.4 讨论
第三章 LncRNA-Meg3的鉴定与分子功能的分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验样品
3.1.2 主要仪器和设备
3.1.3 主要试剂和耗材
3.1.4 所用引物序列
3.2 实验方法
3.2.1 样品准备
3.2.2 核心转录本筛选确定
3.2.3 过表达载体构建
3.2.4 敲低片段设计
3.2.5 细胞转染
3.3 实验结果
3.4 讨论
第四章 LncRNA-Meg3在肌肉发育中功能初步分析
4.1 实验材料
4.1.1 细胞样品准备
4.1.2 主要仪器和设备
4.1.3 主要试剂和耗材
4.1.4 所用引物序列
4.2 实验方法
4.2.1 细胞样品培养
4.2.2 目的片段准备
4.2.3 体外转录
4.2.4 FISH原位杂交
4.2.5 Pulldown调取相关蛋白
4.2.6 Pulldown调取相关蛋白
4.3 结果与分析
4.4 讨论
第五章 小结
5.1 本研究的主要结论
5.2 下一步研究计划
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3634839
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