神农架金丝猴源肠道益生菌的筛选和鉴定

发布时间：2022-02-22 03:59

　　川金丝猴（Rhinopithecus roxellanae）是中国特有的珍稀物种,我国I级保护动物,湖北省神农架地区是川金丝猴生活的的最东端。由于消化道疾病是金丝猴常发疾病之一,且消化道疾病是导致幼猴死亡的主要原因,因此,维持金丝猴肠道微生态平衡,减少金丝猴消化道疾病的发生,对金丝猴个体健康和种群复壮具有重要意义。本研究以神农架金丝猴为研究对象,通过采集野生金丝猴的粪便300份,MRS培养基共分离到92株兼性乳酸菌,92株菌发酵液上清对病原指示菌均有抑菌活性,但各菌株之间抑菌差异性较大。其中抑菌效果最明显的是dlt6a、dlt6b、dlt6c、dlt7a、 dlt7b、dlt9、dltl0a和dlt10b共8株菌。对该8株菌进行属、种的鉴定,鉴定结果表明分离的8株菌均为粪肠球菌。16S rRNA基因序列扩增测序,肠球菌种特异性片段ddlE、faecalis、ddlE、faecium扩增检测,进一步确证8株分离细菌为粪肠球菌。对分离的粪肠球菌进行安全性评价,包括抗生素耐药性检测和毒力因子检测,减少菌株存在的潜在危险性。毒力因子的检测方式为PCR扩增cylA、esp、gelE、agg、 e... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1 川金丝猴研究进展
        1.1 金丝猴的分类
        1.2 川金丝猴的生物学特性
            1.2.1 川金丝猴的地理分布和种群数量
            1.2.2 生活习性
            1.2.3 食性
            1.2.4 社群结构
        1.3 神农架川金丝猴在科学研究上的特殊地位
        1.4 川金丝猴的研究进展
            1.4.1 川金丝猴研究历史
            1.4.2 川金丝猴近期研究
            1.4.3 川金丝猴疾病研究
    2 益生菌研究进展
        2.1 益生菌的定义
        2.2 益生菌的菌种
        2.3 益生菌的作用机制
            2.3.1 产生抑菌物质
            2.3.2 维持肠道正常菌群结构
            2.3.3 与致病菌竞争作用
            2.3.4 增强免疫力
            2.3.5 提高消化吸收功能
        2.4 益生菌的筛选
            2.4.1 安全性
            2.4.2 有效性
            2.4.3 可生产性
        2.5 益生菌的临床应用
            2.5.1 防治腹泻和便秘
            2.5.2 防治炎症性肠病
            2.5.3 降低血清胆固醇
            2.5.4 缓解乳糖不耐症状
            2.5.5 预防和抑制肿瘤
        2.6 益生菌存在的问题
            2.6.1 益生菌的活性问题
            2.6.2 菌株的安全性问题
            2.6.3 肠道优势菌群的形成难以保证
            2.6.4 益生菌的作用机理
            2.6.5 益生菌种缺乏
    3 益生肠球菌的研究进展
        3.1 肠球菌的分类及生理学特性
        3.2 肠球菌的应用
            3.2.1 在食品中的应用
            3.2.2 在医药中的应用
            3.2.3 在畜禽上的应用
        3.3 肠球菌的安全性
            3.3.1 肠球菌的抗生素抗性
            3.3.2 肠球菌的毒力因子
    4. 本研究的目的与意义
第二章 肠球菌的初步筛选及鉴定
    1 研究目的和意义
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 菌株和载体
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要试剂及溶液的配制
            2.1.4 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 菌株的分离
            2.2.2 菌株发酵上清液体外抗(抑)菌性试验
            2.2.3 肠球菌属的鉴定
            2.2.4 肠球菌的种鉴定
            2.2.5 菌株的确证
    3 结果与分析
        3.1 细菌的初步分离筛选
        3.2 肠球菌发酵上清液的体外抗(抑)菌性试验
        3.3 肠球菌属的鉴定
        3.4 肠球菌种的鉴定
        3.5 肠球菌的确证实验
            3.5.1 种特异性鉴定
            3.5.2 16S rRNA基因序列的扩增
            3.5.3 16S rRNA基因的测序结果
    4 讨论
        4.1 肠球菌的鉴定
        4.2 肠球菌的抑菌性
    5 本章小结
第三章 肠球菌的安全性评价
    1 研究目的和意义
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株和载体
            2.1.2 供试动物
            2.1.3 药品
            2.1.4 主要试剂的配制
            2.1.5 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 肠球菌毒力因子的检测
            2.2.2 抗生素敏感性试验
            2.2.3 粪肠球菌动物试验
    3 结果与分析
        3.1 肠球菌毒力因子的检测
            3.1.1 肠球菌毒力基因检测
            3.1.2 肠球菌毒力相关表型检测
        3.2 抗生素敏感性试验结果
            3.2.1 常用抗生素敏感性试验
            3.2.2 饲料常用添加抗生素敏感性实验(MIC法)
        3.3 粪肠球菌动物试验结果
            3.3.1 受试小鼠一般体态特征观察
            3.3.2 细菌易位试验
            3.3.3 脏器指数测定
            3.3.4 脏器组织形态学观察
    4 讨论
        4.1 肠球菌的毒力
        4.2 肠球菌的耐药性
    5 本章小结
第四章 粪肠球菌的生物特性研究
    1 研究目的和意义
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株与细胞
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要试剂及溶液的配制
            2.1.4 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 抗逆性试验
            2.2.2 生长曲线的测定
    3 结果与分析
        3.1 抗逆性试验结果
            3.1.1 pH值对粪肠球菌存活的影响
            3.1.2 粪肠球菌对胆盐的耐受性结果
            3.1.3 高温对粪肠球菌存活的影响
        3.2 生长曲线的测定
    4 讨论
    5 本章小结
结论
参考文献
致谢



本文编号：3638652