鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV后E.coli LPS刺激对其先天性免疫相关基因表达的影响
发布时间：2022-02-22 04:48
H9N2亚型禽流感病毒（Avain influenza virus,AIV）在全世界广泛分布,能引起蛋鸡产蛋下降,肉鸡生长发育迟缓。鸡感染H9N2亚型禽流感病毒后易发生继发感染,特别是和大肠杆菌混合感染,会造成了严重的经济损失。脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,是大肠杆菌感染中的一个重要的毒力因子,它可以通过巨噬细胞或者树突状细胞激活先天性免疫反应。目前,关于H9N2 AIV感染后继发大肠杆菌感染的先天性免疫的研究还不清楚,为了揭示机体感染H9N2 AIV后继发大肠杆菌感染时的全身性感染和炎症损伤的潜在机制和了解二者协同致病机理,本研究采用实时荧光定量PCR的方法来检测鸡巨噬细胞（HD-11）分别单独感染H9N2 AIV或E.coli LPS、感染H9N2 AIV同时添加E.coli LPS刺激、感染H9N2后24 h添加E.coli LPS刺激的先天免疫相关基因的转录水平。结果表明:1.鸡巨噬细胞单独感染H9N2 AIV组和复合H9N2 AIV/E.coli LPS共作用组的病毒载量在各时间点的上升趋势相似,且在1 h8<...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 H9N2 AIV的研究进展
1.1 禽流感概述
1.1.1 病原学
1.1.2 禽流感病毒的复制及致病机理
1.1.3 禽流感病毒的流行病学
1.1.4 流感病毒相关的先天性免疫因子
1.2 H9N2 AIV的临床症状
1.3 H9N2 AIV的流行特点
1.4 H9N2 AIV的遗传变异
1.5 H9N2 AIV与其他病原体的混合感染
1.6 本研究的目的和意义
试验研究
第二章 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV后E. coli LPS刺激对其先天性免疫相关基因表达的影响
2.1 材料
2.1.1 细胞和病毒
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 主要溶液的配制
2.2 方法
2.2.1 病毒的增殖
2.2.2 细胞的处理
2.2.2.1 不同浓度E. coli LPS刺激鸡巨噬细胞
2.2.2.2 H9N2 AIV单独感染鸡巨噬细胞
2.2.2.3 E. coli LPS单独刺激鸡巨噬细胞
2.2.2.4 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV同时添加E. coli LPS刺激
2.2.2.5 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV后 24 h添加E. coli LPS刺激
2.2.3 细胞总RNA的提取
2.2.4 将RNA反转录成cDNA
2.2.5 引物的设计与合成
2.2.6 病毒载量的测定
2.2.7 qRT-PCR法检测先天性免疫相关基因的表达
2.2.7.1 qRT-PCR法检测趋化因子CXCLi1、CXCLi2 mRNA的表达水平
2.2.7.2 qRT-PCR法检测促炎性因子IL-1β、IL-6、IFN-α mRNA的表达水平
2.2.7.3 qRT-PCR法检测抑炎性因子IL-10、TGF-β3 mRNA的表达水平
2.2.7.4 qRT-PCR法检测受体TLR4、MDA5 mRNA的表达水平
2.2.7.5 qRT-PCR法检测iNOS mRNA的表达水平
2.2.8 实验数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 H9N2 AIV单独感染和H9N2 AIV与LPS共作用鸡巨噬细胞后病毒载量的测定
2.3.2 不同浓度LPS刺激HD-11细胞中iNOS表达水平
2.3.3 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中趋化因子的表达水平
2.3.4 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中促炎性因子的表达水平
2.3.5 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中抑炎性因子的表达水平
2.3.6 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中模式识别受体的表达水平
2.3.7 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中iNOS mRNA的表达水平
2.4 讨论
结论
参考文献
缩略词表
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]山东省部分地区鸡源大肠杆菌与低致病性H9亚型禽流感病毒混合感染的调查[J]. 刘香敏,纪鸿翔,王建琳,尹燕博. 黑龙江畜牧兽医. 2016(04)
[2]MDRV和H9 AIV共感染对番鸭免疫反应的抑制作用[J]. 林锋强,朱小丽,陈少莺,王劭,程晓霞,陈仕龙,蔡羲,高春亮,李兆龙. 中国兽医学报. 2011(08)
[3]中国禽流感流行株的分离鉴定[J]. 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震. 中国畜禽传染病. 1998(01)
博士论文
[1]2009-2011年国内传染性支气管炎病毒分子流行病学研究及以马立克病毒为载体的基因工程疫苗研制[D]. 张小荣.扬州大学 2012
[2]新城疫—禽流感H9二联灭活疫苗的研究[D]. 杜元钊.南京农业大学 2011
硕士论文
[1]潍坊地区肉仔鸡“支气管栓塞”流行病学调查、病原分离鉴定及防控技术研究[D]. 齐茜.山东农业大学 2014
[2]MPAIV与较低致病性禽源E.coli的协同致病作用及不同感染途径对MPAIV致病性的影响[D]. 高璐.扬州大学 2005
[3]低致病性禽流感病毒与禽源大肠杆菌的协同致病作用[D]. 曹丽萍.扬州大学 2003
本文编号：3638728
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 H9N2 AIV的研究进展
1.1 禽流感概述
1.1.1 病原学
1.1.2 禽流感病毒的复制及致病机理
1.1.3 禽流感病毒的流行病学
1.1.4 流感病毒相关的先天性免疫因子
1.2 H9N2 AIV的临床症状
1.3 H9N2 AIV的流行特点
1.4 H9N2 AIV的遗传变异
1.5 H9N2 AIV与其他病原体的混合感染
1.6 本研究的目的和意义
试验研究
第二章 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV后E. coli LPS刺激对其先天性免疫相关基因表达的影响
2.1 材料
2.1.1 细胞和病毒
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 主要溶液的配制
2.2 方法
2.2.1 病毒的增殖
2.2.2 细胞的处理
2.2.2.1 不同浓度E. coli LPS刺激鸡巨噬细胞
2.2.2.2 H9N2 AIV单独感染鸡巨噬细胞
2.2.2.3 E. coli LPS单独刺激鸡巨噬细胞
2.2.2.4 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV同时添加E. coli LPS刺激
2.2.2.5 鸡巨噬细胞感染H9N2 AIV后 24 h添加E. coli LPS刺激
2.2.3 细胞总RNA的提取
2.2.4 将RNA反转录成cDNA
2.2.5 引物的设计与合成
2.2.6 病毒载量的测定
2.2.7 qRT-PCR法检测先天性免疫相关基因的表达
2.2.7.1 qRT-PCR法检测趋化因子CXCLi1、CXCLi2 mRNA的表达水平
2.2.7.2 qRT-PCR法检测促炎性因子IL-1β、IL-6、IFN-α mRNA的表达水平
2.2.7.3 qRT-PCR法检测抑炎性因子IL-10、TGF-β3 mRNA的表达水平
2.2.7.4 qRT-PCR法检测受体TLR4、MDA5 mRNA的表达水平
2.2.7.5 qRT-PCR法检测iNOS mRNA的表达水平
2.2.8 实验数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 H9N2 AIV单独感染和H9N2 AIV与LPS共作用鸡巨噬细胞后病毒载量的测定
2.3.2 不同浓度LPS刺激HD-11细胞中iNOS表达水平
2.3.3 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中趋化因子的表达水平
2.3.4 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中促炎性因子的表达水平
2.3.5 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中抑炎性因子的表达水平
2.3.6 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中模式识别受体的表达水平
2.3.7 H9N2 AIV感染后LPS刺激HD-11细胞中iNOS mRNA的表达水平
2.4 讨论
结论
参考文献
缩略词表
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]山东省部分地区鸡源大肠杆菌与低致病性H9亚型禽流感病毒混合感染的调查[J]. 刘香敏,纪鸿翔,王建琳,尹燕博. 黑龙江畜牧兽医. 2016(04)
[2]MDRV和H9 AIV共感染对番鸭免疫反应的抑制作用[J]. 林锋强,朱小丽,陈少莺,王劭,程晓霞,陈仕龙,蔡羲,高春亮,李兆龙. 中国兽医学报. 2011(08)
[3]中国禽流感流行株的分离鉴定[J]. 唐秀英,田国斌,赵传删,周金法,于康震. 中国畜禽传染病. 1998(01)
博士论文
[1]2009-2011年国内传染性支气管炎病毒分子流行病学研究及以马立克病毒为载体的基因工程疫苗研制[D]. 张小荣.扬州大学 2012
[2]新城疫—禽流感H9二联灭活疫苗的研究[D]. 杜元钊.南京农业大学 2011
硕士论文
[1]潍坊地区肉仔鸡“支气管栓塞”流行病学调查、病原分离鉴定及防控技术研究[D]. 齐茜.山东农业大学 2014
[2]MPAIV与较低致病性禽源E.coli的协同致病作用及不同感染途径对MPAIV致病性的影响[D]. 高璐.扬州大学 2005
[3]低致病性禽流感病毒与禽源大肠杆菌的协同致病作用[D]. 曹丽萍.扬州大学 2003
本文编号：3638728
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