兔铁蛋白重链与兔出血症病毒相互作用的研究

发布时间：2022-02-22 07:31

　　兔出血症病毒（RHDV）属于兔病毒属嵌杯病毒科，能引起成年兔的一种急性、败血性、高度接触性传染病，即兔出血症（RHD）。RHD爆发首次报道是在1984年中国江苏省，随后该病毒在世界各地流行，目前许多国家存在该流行病。由于缺少合适的细胞系进行RHDV病毒增殖，严重阻碍了RHDV致病机理的研究。目前，RHDV致病机理通过间接方法进行研究。人组织血型抗原（HBGA）H2是RHDV吸附因子，已经被证明。兔肝细胞是RHDV病毒繁殖的靶细胞，但是兔肝细胞没有表达HBGAH2，因此可以推断在兔肝细胞上存在其他的RHDV吸附因子。研究存在于兔肝细胞上的RHDV吸附因子或作用因子对于研究RHDV致病机理具有重要意义。本实验室前期构建了兔肝细胞的表达文库，并通过表达克隆技术进行文库筛选与VP60相互作用的候选蛋白，兔铁蛋白重链是RHDV相互作用候选蛋白之一。为验证本实验室前期实验中初步鉴定的兔铁蛋白重链（FTH）与RHDV衣壳蛋白（VP60）具有相互作用关系，本研究采用RT-PCR技术从兔肝脏扩增编码FTH基因，并将其克隆于pET32a（+）中转化至肠杆菌BL21（DE3）Plyss中进行表达。重组FTH... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 病毒概况
    1.2 病原学
    1.3 流行病学
    1.4 病毒生活史
    1.5 致病RHDV的进化
    1.6 RHDV与宿主的共同进化
    1.7 家兔抵抗RHDV的机制
    1.8 铁蛋白的研究进展
        1.8.1 铁蛋白的结构和功能
        1.8.2 铁蛋白与致癌基因、癌症
    1.9 研究蛋白质相互作用的方法
        1.9.1 酵母双杂交
        1.9.2 标签蛋白
        1.9.3 免疫共沉淀
        1.9.4 荧光共振能量转移技术
        1.9.5 表达克隆法
    1.10 本研究的目的及意义
第二章 兔FTH与RHDV相互作用的研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验动物及病毒
        2.1.2 菌株及质粒
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 兔FTH基因的克隆及表达载体的构建
        2.1.6 FTH蛋白表达纯化
        2.1.7 GST-VP60及GST蛋白的表达纯化
        2.1.8 GSTpulldown研究rFTH与VP60的相互作用
        2.1.9 ELISA研究rFTH与VP60的相互作用
        2.1.10 免疫共沉淀研究FTH与RHDV的相互作用
        2.1.11 ELISA研究FTH与RHDV的相互作用
        2.1.12 血凝抑制试验
        2.1.13 动物实验
    2.2 结果
        2.2.1 FTH基因的克隆
        2.2.2 FTH基因的表达与纯化
        2.2.3 GST-VP60及GST表达及纯化
        2.2.4 GSTpulldown研究FTH与VP60相互作用结果
        2.2.5 ELISA研究FTH与VP60相互作用结果
        2.2.6 免疫共沉淀研究FTH与RHDV相互作用结果
        2.2.7 ELISA研究FTH与RHDV相互作用结果
        2.2.8 血凝抑制结果
        2.2.9 动物试验结果
    2.3 讨论
第三章 结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3638985