鉴别检测裂谷热病毒NSs缺失型疫苗株与野生株模拟物的双重荧光定量RT-PCR方法的建立

发布时间：2022-02-22 13:20

　　为了建立一种能够鉴别检测裂谷热病毒野毒株与NSs缺失型疫苗株的荧光定量RT-PCR方法,本研究通过对裂谷热病毒基因组序列进行比较分析,选择其S节段NSs基因及L节段L基因的无二级结构且保守的区段,分别设计多对引物和探针,通过试验验证并优化反应条件,筛选出最佳引物和探针的组合,建立了可以快速检测裂谷热病毒并区分NSs基因缺失疫苗株和野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测羊临床常见病原,结果显示该方法仅对裂谷热质粒标准品样品检测为阳性,不与羊常见的其他病原出现阳性反应,特异性强;将裂谷热质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的方法进行检测,结果显示,该方法对NSs和L基因重组质粒标准品的检测下限分别为10拷贝/μL和100拷贝/μL,敏感度高;重复性实验结果显示,该方法组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。将NSs缺失型和非缺失型质粒分别转染细胞,提取核酸,利用本方法进行检测,结果显示该方法可有效区分NSs基因缺失型和非缺失型核酸样品。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法为鉴别野生病毒株和NSs缺失型疫苗株奠定了技术基础。 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 疫苗及相关病原
    1.3引物和探针的设计
    1.4 重组质粒标准品的构建
    1.5 双重荧光定量RT-PCR方法反应体系的优化及标准曲线的建立
    1.6 特异性试验
    1.7 敏感性试验
    1.8 重复性试验
    1.9 对野生型和缺失型病毒核酸样品的检测
    1.10临床样品的检测
2 结果
    2.1 双重荧光定量方法的建立和优化
    2.2标准曲线的建立
    2.3 特异性试验结果
    2.4 敏感性试验结果
    2.5 重复性试验结果
    2.6 野生型和缺失型病毒核酸样品的检测
    2.7 临床样品的检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3639527