猫传染性腹膜炎病毒抑制Ⅰ型干扰素通路分子机制研究
发布时间：2022-02-22 13:37
猫传染性腹膜炎（FIP）是由猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）引起的,对家猫和野生猫科动物可致死的重要传染病之一,约有5%的家猫死于FIP。FIPV可以在单核细胞和巨噬细胞中有效且持续性复制,致使感染的单核巨噬细胞激活,并造成全身性的感染。天然免疫系统利用模式识别受体（PRRs）对入侵病原体的病原相关分子模式（PAMPs）进行识别,启动宿主抗病原微生物的反应,诱导Ⅰ型干扰素和促炎性因子激活,进而抵抗病原微生物的感染。冠状病毒可以进化出多种策略逃避宿主天然免疫应答。然而,FIPV是否可获得拮抗Ⅰ型干扰素应答的能力以及免疫逃逸分子机制的相关研究报道较少,本研究以FIPV毒株DF2作为研究对象,探究FIPV对Ⅰ型干扰素信号通路激活的抑制作用,揭示FIPV nsp5阻断信号传递抑制IFN-β应答的分子机制,可为FIPV调控宿主Ⅰ型干扰素免疫应答实现免疫逃逸的分子机制研究提供新思路,也为FIPV致病机制的研究和抗病毒药物和疫苗的研发提供科学支撑。为了探究FIPV感染宿主细胞后对Ⅰ型干扰素应答的影响,本研究利用双荧光素酶报告实验和荧光定量PCR对IFN-β启动子活性水平和IFN-β以及下游ISGs m...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：80 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 猫传染性腹膜炎及猫传染性腹膜炎病毒的研究进展
1.1.1 猫传染性腹膜炎的流行病学
1.1.2 猫传染性腹膜炎临床症状
1.1.3 猫传染性腹膜炎病毒致病机制
1.1.4 猫传染性腹膜炎病毒基因组及编码蛋白
1.1.5 猫传染性腹膜炎病毒和猫肠道冠状病毒的鉴定
1.2 宿主抗病毒天然免疫
1.2.1 TLRs介导的信号通路
1.2.2 RLRs介导的信号通路
1.2.3 DNA受体介导的信号通路
1.3 冠状病毒调控干扰素信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.4 本研究的目的和意义
第二章 FIPV感染调控宿主RLR信号通路抑制Ⅰ型干扰素应答
2.1 材料和方法
2.1.1 毒株和细胞
2.1.2 主要试剂和实验仪器
2.1.3 猫IFN-β荧光素酶报告质粒的构建
2.1.4 鼠源N蛋白多克隆抗体的制备
2.1.5 细胞转染
2.1.6 细胞总RNA的提取和反转录
2.1.7 FIPV-DF2 感染对IFN-β启动子活性检测
2.1.8 FIPV-DF2 感染对IFN-β和 ISGs mRNA检测
2.1.9 FIPV-DF2 感染对Ⅰ型干扰素通路激活分析
2.1.10 FIPV-DF2 感染对SeV或 poly(I:C)诱导的IRF3 启动子活性激活分析
2.1.11 FIPV-DF2 感染对IRF3 磷酸化分析
2.1.12 FIPV-DF2 感染对IRF3在CRFK细胞中定位分析
2.1.13 数据分析
2.2 结果
2.2.1 FIPV-DF2 感染不能诱导IFN-β应答和ISGs表达
2.2.2 FIPV-DF2 感染剂量依赖性的抑制Ⅰ型干扰素通路激活
2.2.3 FIPV-DF2 感染通过阻断IRF3 通路抑制IFN-β应答
2.3 讨论
第三章 FIPV nsp5 通过多位点切割NEMO抑制Ⅰ型干扰素应答
3.1 材料和方法
3.1.1 毒株和细胞
3.1.2 主要试剂和实验仪器
3.1.3 真核表达质粒的构建
3.1.4 FIPV-nsp5 过表达对IFN-β应答的作用分析
3.1.5 FIPV-nsp5 过表达对RLR信号通路作用分析
3.1.6 FIPV-nsp5对RLR信号通路接头分子切割分析
3.1.7 蛋白酶活性和凋亡相关降解途径对FIPV-nsp5 介导NEMO切割的影响
3.1.8 FIPV-nsp5 切割NEMO位点分析
3.1.9 FIPV-DF2 感染对内源性NEMO切割分析
3.1.10 NEMO切割产物对干扰素信号通路激活分析
3.1.11 FIPV-DF2 感染对IRF3 磷酸化的影响
3.1.12 FIPV-nsp5 过表达对NEMO与 TANK相互作用的影响
3.2 结果
3.2.1 FIPV-nsp5 抑制IFN-β应答呈剂量依赖性且依赖其蛋白酶活性
3.2.2 FIPV-nsp5 抑制RIG-I介导的Ⅰ型干扰素信号通路
3.2.3 FIPV-nsp5 切割RLR信号通路中的接头分子NEMO
3.2.4 FIPV-nsp5 切割NEMO依赖其蛋白酶活性
3.2.5 FIPV-nsp5 切割NEMO位点
3.2.6 内源性NEMO在感染FIPV-DF2的CRFK细胞中被切割
3.2.7 FIPV-nsp5 通过切割NEMO抑制RIG-I介导的Ⅰ型干扰素信号通路
3.3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]冠状病毒非结构蛋白的研究进展[J]. 边葶苈,周继勇,廖敏. 中国动物传染病学报. 2013(04)
本文编号：3639555
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：80 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 猫传染性腹膜炎及猫传染性腹膜炎病毒的研究进展
1.1.1 猫传染性腹膜炎的流行病学
1.1.2 猫传染性腹膜炎临床症状
1.1.3 猫传染性腹膜炎病毒致病机制
1.1.4 猫传染性腹膜炎病毒基因组及编码蛋白
1.1.5 猫传染性腹膜炎病毒和猫肠道冠状病毒的鉴定
1.2 宿主抗病毒天然免疫
1.2.1 TLRs介导的信号通路
1.2.2 RLRs介导的信号通路
1.2.3 DNA受体介导的信号通路
1.3 冠状病毒调控干扰素信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.4 本研究的目的和意义
第二章 FIPV感染调控宿主RLR信号通路抑制Ⅰ型干扰素应答
2.1 材料和方法
2.1.1 毒株和细胞
2.1.2 主要试剂和实验仪器
2.1.3 猫IFN-β荧光素酶报告质粒的构建
2.1.4 鼠源N蛋白多克隆抗体的制备
2.1.5 细胞转染
2.1.6 细胞总RNA的提取和反转录
2.1.7 FIPV-DF2 感染对IFN-β启动子活性检测
2.1.8 FIPV-DF2 感染对IFN-β和 ISGs mRNA检测
2.1.9 FIPV-DF2 感染对Ⅰ型干扰素通路激活分析
2.1.10 FIPV-DF2 感染对SeV或 poly(I:C)诱导的IRF3 启动子活性激活分析
2.1.11 FIPV-DF2 感染对IRF3 磷酸化分析
2.1.12 FIPV-DF2 感染对IRF3在CRFK细胞中定位分析
2.1.13 数据分析
2.2 结果
2.2.1 FIPV-DF2 感染不能诱导IFN-β应答和ISGs表达
2.2.2 FIPV-DF2 感染剂量依赖性的抑制Ⅰ型干扰素通路激活
2.2.3 FIPV-DF2 感染通过阻断IRF3 通路抑制IFN-β应答
2.3 讨论
第三章 FIPV nsp5 通过多位点切割NEMO抑制Ⅰ型干扰素应答
3.1 材料和方法
3.1.1 毒株和细胞
3.1.2 主要试剂和实验仪器
3.1.3 真核表达质粒的构建
3.1.4 FIPV-nsp5 过表达对IFN-β应答的作用分析
3.1.5 FIPV-nsp5 过表达对RLR信号通路作用分析
3.1.6 FIPV-nsp5对RLR信号通路接头分子切割分析
3.1.7 蛋白酶活性和凋亡相关降解途径对FIPV-nsp5 介导NEMO切割的影响
3.1.8 FIPV-nsp5 切割NEMO位点分析
3.1.9 FIPV-DF2 感染对内源性NEMO切割分析
3.1.10 NEMO切割产物对干扰素信号通路激活分析
3.1.11 FIPV-DF2 感染对IRF3 磷酸化的影响
3.1.12 FIPV-nsp5 过表达对NEMO与 TANK相互作用的影响
3.2 结果
3.2.1 FIPV-nsp5 抑制IFN-β应答呈剂量依赖性且依赖其蛋白酶活性
3.2.2 FIPV-nsp5 抑制RIG-I介导的Ⅰ型干扰素信号通路
3.2.3 FIPV-nsp5 切割RLR信号通路中的接头分子NEMO
3.2.4 FIPV-nsp5 切割NEMO依赖其蛋白酶活性
3.2.5 FIPV-nsp5 切割NEMO位点
3.2.6 内源性NEMO在感染FIPV-DF2的CRFK细胞中被切割
3.2.7 FIPV-nsp5 通过切割NEMO抑制RIG-I介导的Ⅰ型干扰素信号通路
3.3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]冠状病毒非结构蛋白的研究进展[J]. 边葶苈,周继勇,廖敏. 中国动物传染病学报. 2013(04)
本文编号：3639555
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3639555.html
