新型猪α干扰素YNS突变体的构建及其抗病毒活性检测

发布时间：2022-04-23 17:54

　　试验旨在获得高活性的猪α干扰素（porcine interferon alpha, PoIFN-α）。利用融合PCR方法将天然猪α干扰素基因进行定点突变,突变位点为58H（CAT）→Y（TAC）、59E（GAG）→N（AAC）及61L（CTC）→S（AGC）。将突变基因克隆到pET-32a载体上,转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达和鉴定,利用MTT法检测猪α干扰素对Vero细胞的抗增殖能力,利用Vero/VSV系统上测定其抗病毒活性。结果显示,重组蛋白表达形式为包涵体,蛋白分子质量约33 kDa,纯化后猪α干扰素YNS突变体蛋白的CC₅₀为462.7μg/mL,其抗病毒活性为1.63×10~6 IU/mg,相比天然干扰素蛋白活性提高。本研究成功构建了高效猪α干扰素YNS突变体,为干扰素的临床应用提供理论基础。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒与菌株
    1.2 细胞与病毒
    1.3 主要试剂
    1.4 引物设计及合成
    1.5 猪α干扰素YNS突变体基因的扩增
    1.6 重组表达载体pET-32a-IFN-α的构建
    1.7 重组质粒pET-32a-IFN-α的表达及鉴定
    1.8 表达产物的纯化
    1.9 蛋白内毒素测定
    1.10 干扰素的生物活性测定
    1.11 统计分析
2 结果
    2.1 猪α干扰素突变体的克隆
    2.2 重组蛋白的表达及鉴定
    2.3 内毒素检测
    2.4 蛋白生物活性测定结
        2.4.1 干扰素细胞安全浓度检测
        2.4.2 抗病毒活性检测结果
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]双重荧光RPA扩增方法快速鉴别两种血清型水泡性口炎病毒[J]. 林彦星,曹琛福,曾少灵,杨俊兴,吕建强,刘丽娟,花群义.  病毒学报. 2017(05)
[2]猪α干扰素基因突变、表达及其高效抗病毒活性筛选研究[J]. 李爽,张杏,崔栩,刘海燕,苏敬良,金忠辉.  中国兽药杂志. 2015(04)
[3]猪α-干扰素表达系统及其应用的研究进展[J]. 张杏,李爽,崔栩,刘海燕,苏敬良,金忠辉.  中国兽药杂志. 2014(10)
[4]猪干扰素α和γ在杆状病毒中共表达及对PRRSV抑制作用[J]. 王彦彬,孙向丽,魏战勇,陈红英,杨明凡,崔保安.  中国农业科学. 2011(09)
[5]猪α干扰素原核表达载体的构建及表达[J]. 刘占通,崔保安,舒畅,金喜新,陈红英,杨明凡,魏战勇.  河南农业大学学报. 2006(04)
[6]一种新的猪α-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达[J]. 曹瑞兵,张素芳,蔡梅红,王艳,陈德胜,陈溥言.  农业生物技术学报. 2004(03)
[7]重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达[J]. 陈涛,于瑞嵩,刘惠莉,李震,曹祥荣.  生物工程学报. 2002(03)



本文编号：3647688