褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节和生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究
发布时间：2022-04-23 19:07
奶水牛和生猪是国家鼓励和优先发展的两大产业。开发提高水牛繁殖力和猪生长速度的新技术,是促进上述两大产业发展的重要举措。为了：①探讨水牛卵泡发育的调节机制,促进水牛繁殖新技术的发展；②优化生长抑素基因免疫程度,分析该疫苗的生物安全性,促进该疫苗的推广应用本研究利用。因此本研究从褪黑激素对水牛卵泡颗粒细胞体外调节、生长抑素基因免疫程序优化与安全性评定等角度开展研究,主要内容和结果如下：1.褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节及其作用机制研究褪黑激素（MLT）受光信号控制,对生殖系统、特别是卵巢功能具有调节作用。MLT对水牛卵泡发育是否有调节作用,尚不清楚。本实验从颗粒细胞的褪黑激素受体表达、调节及外源MLT对水牛颗粒细胞凋亡、增殖与激素分泌等方面进行了研究,主要内容和结果如下：（1）提取水牛颗粒细胞RNA,经反转录获得细胞cNDA,并成功扩增出MT1受体特异性条带,表明水牛颗粒细胞表达褪黑激素受体。（2）将水牛颗粒细胞用含低（0.1nM）、中（1nM）、高（100nM）剂量MLT的培养液处理24小时,在mRNA水平检测MTl及相关受体的表达情况,结果发现,MT1受体表达在各浓度MLT作用下明显上调...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略语表
第一部分 文献综述
1 我国奶水牛发展现状及同期发情技术应用
2 褪黑激素对生殖系统的调控作用
2.1 褪黑激素对性腺轴的调控作用
2.2 褪黑激素对卵巢功能的调节作用
2.3 褪黑激素的其他作用
2.4 褪黑激素受体研究进展
3 颗粒细胞对卵泡的作用
3.1 颗粒细胞对卵泡发育的调节
3.2 颗粒细胞对卵泡闭锁的调节
4 生长抑素基因疫苗免疫及其研究进展
4.1 我国生猪发展现状及生长抑素DNA疫苗的研究进展
4.2 提高SS基因疫苗的免疫效果
4.2.1 基因疫苗的免疫方式
4.2.1.1 皮内注射法
4.2.1.2 粘膜免疫法
4.2.1.3 肌肉注射法
4.2.1.4 电转化法
4.2.1.5 其他免疫方式
4.2.2 基因疫苗的免疫剂量和免疫次数
4.3 基因疫苗的安全性和应用前景
第二部分 实验研究
一、褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节
1 试验材料
1.1 试验细胞
1.2 主要实验试剂及耗材
1.3 实验主要试剂盒
1.4 实验主要抗体
1.5 实验引物设计列表
1.6 实验主要仪器
1.7 实验主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 水牛颗粒细胞的分离与培养
2.2 褪黑激素受体在水牛颗粒细胞表达的检测
2.2.1 颗粒细胞总RNA的提取及cDNA第一链合成
2.2.2 PCR扩增MT受体基因
2.3 外源添加MLT处理水牛颗粒细胞
2.4 水牛颗粒细胞用MLT处理后相关基因表达分析
2.5 颗粒细胞用MLT处理后采用流式技术检测细胞的凋亡
2.6 颗粒细胞用MLT处理后采用流式技术检测细胞的周期
2.7 颗粒细胞用MLT处理后采用ELISA检测雌、孕激素浓度
2.8 颗粒细胞用MLT处理后凋亡和周期调控因子的蛋白印迹检测
2.8.1 水牛颗粒细胞总蛋白的提取
2.8.2 水牛颗粒细胞总蛋白含量的测定
2.8.3 SDS-PAGE电泳及蛋白成像
3 结果与分析
3.1 褪黑激素受体在水牛颗粒细胞表达的检测
3.2 水牛颗粒细胞用MLT处理后相关基因表达、细胞凋亡周期及激素内分泌的影响
3.2.1 颗粒细胞在mRNA水平相关受体基因表达量的变化
3.2.2 颗粒细胞用MLT处理后类固醇激素分泌量的检测
3.2.3 颗粒细胞用MLT处理后对细胞凋亡和周期的影响及相关调控因子在蛋白水平的表达量
4 讨论
二、生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 试验质粒菌种
1.3 主要实验试剂及耗材
1.4 主要仪器设备
1.5 实验引物设计列表
1.6 主要试剂配制
2 试验方法
2.1 质粒的小量提取
2.2 质粒的酶切鉴定
2.3 质粒的大量提取
2.4 实验分组及免疫程序
2.5 称重记录、血样采集和肌肉、脂肪组织的样品采集
2.6 抗体检测
2.7 激素测定
2.8 组织DNA的提取
3 结果与分析
3.1 质粒的酶切鉴定
3.2 试验猪不同阶段血浆中CST,GH,SS激素的分泌量
3.2.1 皮质抑素水平
3.2.2 生长激素水平
3.2.3 生长抑素水平
3.3 试验猪的免疫应答反应及免疫后抗体水平变化
3.4 免疫后猪日增重
3.5 安全性检测
4 讨论
4.1 生长抑素DNA疫苗不同免疫方式和免疫剂量的效果评价
4.2 生长抑素DNA疫苗的安全性检测
全文结论
创新与不足
创新之处
不足之处
参考文献
致谢
本文编号：3647805
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略语表
第一部分 文献综述
1 我国奶水牛发展现状及同期发情技术应用
2 褪黑激素对生殖系统的调控作用
2.1 褪黑激素对性腺轴的调控作用
2.2 褪黑激素对卵巢功能的调节作用
2.3 褪黑激素的其他作用
2.4 褪黑激素受体研究进展
3 颗粒细胞对卵泡的作用
3.1 颗粒细胞对卵泡发育的调节
3.2 颗粒细胞对卵泡闭锁的调节
4 生长抑素基因疫苗免疫及其研究进展
4.1 我国生猪发展现状及生长抑素DNA疫苗的研究进展
4.2 提高SS基因疫苗的免疫效果
4.2.1 基因疫苗的免疫方式
4.2.1.1 皮内注射法
4.2.1.2 粘膜免疫法
4.2.1.3 肌肉注射法
4.2.1.4 电转化法
4.2.1.5 其他免疫方式
4.2.2 基因疫苗的免疫剂量和免疫次数
4.3 基因疫苗的安全性和应用前景
第二部分 实验研究
一、褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节
1 试验材料
1.1 试验细胞
1.2 主要实验试剂及耗材
1.3 实验主要试剂盒
1.4 实验主要抗体
1.5 实验引物设计列表
1.6 实验主要仪器
1.7 实验主要试剂的配制
2 实验方法
2.1 水牛颗粒细胞的分离与培养
2.2 褪黑激素受体在水牛颗粒细胞表达的检测
2.2.1 颗粒细胞总RNA的提取及cDNA第一链合成
2.2.2 PCR扩增MT受体基因
2.3 外源添加MLT处理水牛颗粒细胞
2.4 水牛颗粒细胞用MLT处理后相关基因表达分析
2.5 颗粒细胞用MLT处理后采用流式技术检测细胞的凋亡
2.6 颗粒细胞用MLT处理后采用流式技术检测细胞的周期
2.7 颗粒细胞用MLT处理后采用ELISA检测雌、孕激素浓度
2.8 颗粒细胞用MLT处理后凋亡和周期调控因子的蛋白印迹检测
2.8.1 水牛颗粒细胞总蛋白的提取
2.8.2 水牛颗粒细胞总蛋白含量的测定
2.8.3 SDS-PAGE电泳及蛋白成像
3 结果与分析
3.1 褪黑激素受体在水牛颗粒细胞表达的检测
3.2 水牛颗粒细胞用MLT处理后相关基因表达、细胞凋亡周期及激素内分泌的影响
3.2.1 颗粒细胞在mRNA水平相关受体基因表达量的变化
3.2.2 颗粒细胞用MLT处理后类固醇激素分泌量的检测
3.2.3 颗粒细胞用MLT处理后对细胞凋亡和周期的影响及相关调控因子在蛋白水平的表达量
4 讨论
二、生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究
1 试验材料
1.1 试验动物
1.2 试验质粒菌种
1.3 主要实验试剂及耗材
1.4 主要仪器设备
1.5 实验引物设计列表
1.6 主要试剂配制
2 试验方法
2.1 质粒的小量提取
2.2 质粒的酶切鉴定
2.3 质粒的大量提取
2.4 实验分组及免疫程序
2.5 称重记录、血样采集和肌肉、脂肪组织的样品采集
2.6 抗体检测
2.7 激素测定
2.8 组织DNA的提取
3 结果与分析
3.1 质粒的酶切鉴定
3.2 试验猪不同阶段血浆中CST,GH,SS激素的分泌量
3.2.1 皮质抑素水平
3.2.2 生长激素水平
3.2.3 生长抑素水平
3.3 试验猪的免疫应答反应及免疫后抗体水平变化
3.4 免疫后猪日增重
3.5 安全性检测
4 讨论
4.1 生长抑素DNA疫苗不同免疫方式和免疫剂量的效果评价
4.2 生长抑素DNA疫苗的安全性检测
全文结论
创新与不足
创新之处
不足之处
参考文献
致谢
本文编号：3647805
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