绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因原核表达质粒构建及表达
发布时间：2022-04-27 22:44
绵羊肺腺瘤病（Ovine Pulmonary Adenocarc-inoma,OPA）是由绵羊肺腺瘤病毒（jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）引起的一种慢性、渐进式、传染性羊肿瘤疾病。这种普遍的羊肺肿瘤疾病已在世界上许多国家出现,几乎所有养羊业发达的国家,包括我国黑龙江、内蒙古、新疆、山东都有该病的报道,严重影响世界范围内养羊业的发展[74]。因此确诊该病对于控制和了解其分布具有重要的科学意义。由于OPA病羊体内检测不到循环抗体以及无法在体外建立病原的培养体系[74],常规的免疫学方法、病毒分离鉴定无法诊断。目前,实验室确诊该病主要利用PCR和免疫组织化学方法。本实验为实现免疫组织化学方法诊断该病进行了基础研究。首先根据Gen Bank上发表的绵羊肺腺瘤囊膜基因序列（登录号JQ837489.1）设计引物,对p EGFP-C1/ex JSRV-env质粒（ex JSRV-env与真核表达载体p EGFP-C1的重组质粒）进行PCR、酶切、测序比对,确定该重组质粒含有完整ex JSRV-env基因;然后以p EGFP...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 引言
1.1 逆转录病毒
1.2 外源绵羊肺腺瘤病毒
1.2.1 JSRV基因表达产物与功能
1.2.2 JSRV生活史
1.3 绵羊肺腺瘤病概况
1.4 绵羊肺腺瘤的检测
1.5 原核表达概述
1.5.1 大肠杆菌表达系统的优缺点
1.5.2 大肠杆菌表达系统的基本概念
1.5.3 表达菌的选择
1.5.4 pET表达系统原理
1.6 WesternBlot技术概述
1.6.1 WesternBlot试验的应用和原理
1.6.2 WesternBlot试验的流程
1.7 研究目的及意义
2 实验一绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因获取与原核表达质粒构建
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 方法
2.2.1 引物设计合成及目的片段PCR扩增
2.2.2 pEGFP-C1/exJSRV-env的获取与鉴定
2.2.3 目的基因的扩增
2.2.4 pET-32a载体质粒的制备
2.2.5 原核表达质粒的构建
2.2.6 重组原核表达质粒的鉴定
2.3 结果
2.3.1 pEGFP-C1/exJSRV-env菌落PCR鉴定结果
2.3.2 重组pEGFP-C1/exJSRV-env质粒酶切鉴定结果
2.3.3 重组质粒pET-32a/exJSRV-env菌落PCR鉴定结果
2.3.4 重组质粒pET-32a/exJSRV-env酶切鉴定结果
2.3.5 重组质粒pET-32a/exJSRV-env测序结果
2.4 讨论与小结
3 实验二绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白原核表达
3.1 材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.2 方法
3.2.1 绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白的表达
3.2.2 IPTG最佳诱导浓度的确定
3.2.3 重组蛋白可溶性鉴定
3.3 结果
3.3.1 IPTG最佳诱导浓度的SDS-PAGE确定
3.3.2 重组蛋白可溶性鉴定结果
3.4 讨论与小结
4 实验三绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白WesternBlot检测
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验仪器
4.1.3 实验试剂
4.2 方法
4.3 结果
4.4 讨论与小结
5 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]exJSRV和enJSRV致瘤机制的研究进展[J]. 杨惠,刘淑英. 中国兽医科学. 2018(04)
[2]Human endogenous retrovirus W env increases nitric oxide production and enhances the migration ability of microglia by regulating the expression of inducible nitric oxide synthase[J]. Ran Xiao,Shan Li,Qian Cao,Xiuling Wang,Qiujin Yan,Xiaoning Tu,Ying Zhu,Fan Zhu. Virologica Sinica. 2017(03)
[3]大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达[J]. 张秀娟,杨杰,孙永强,高凤山. 中国畜牧兽医. 2016(12)
[4]水牛ghrelin基因原核表达载体构建与蛋白表达[J]. 农微,谢婉,朱思燃,秦津,崔月明,李爱友,谢体三. 畜牧与兽医. 2016(12)
[5]RNA→cDNA——由“2015年高考理综能力测试40（1）题”引发的思考[J]. 王华峰,孙瑞娴,刘国平,郝晶晶. 中学生物学. 2016(12)
[6]FGF20原核表达载体构建及在大肠杆菌中优化表达[J]. 张磊,吕英,宋玉,王会岩. 生物技术. 2016(05)
[7]新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达[J]. 曾国航,徐宏伟,李莲瑞. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(09)
[8]抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化[J]. 王晓晔,石博妹,王英群,李珣,刘徳玉,李铭,李芳芳,胡传活. 华北农学报. 2016(01)
[9]enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究[J]. 张宇飞,石晶,刘淑英. 畜牧兽医学报. 2015(11)
[10]绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立[J]. 刘月,张宇飞,孙晓林,刘淑英. 畜牧兽医学报. 2015(05)
博士论文
[1]外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析[D]. 孙晓林.内蒙古农业大学 2017
[2]绵羊胎盘绒毛膜滋养层细胞中enJSRV囊膜蛋白的细胞生物学作用[D]. 张宇飞.内蒙古农业大学 2016
[3]丝状支原体PG3株和绵羊肺炎支原体内蒙分离株基因组测序及可变表面脂蛋白基因克隆表达[D]. 徐春光.内蒙古农业大学 2013
[4]禾谷镰孢菌Fusarium graminearum α、β2-微管蛋白的原核表达、体外聚合及药物结合研究[D]. 徐建强.南京农业大学 2012
[5]绵羊肺腺瘤病相关基因突变的检测及绵羊、山羊内源性反转录病毒的扩增[D]. 周艳喜.内蒙古农业大学 2012
[6]绵羊肺腺瘤病自然病例和人工感染病例的临床病理学及分子病理学研究[D]. 么宏强.内蒙古农业大学 2006
硕士论文
[1]重组人可溶性Tim-3原核表达载体的构建及其重组蛋白的优化表达[D]. 白少云.广西医科大学 2017
[2]绵羊肺腺瘤病毒斑点杂交检测方法的建立与初步应用[D]. 吴志强.内蒙古农业大学 2017
[3]绵羊肺腺瘤病PCR检测技术的建立及exJSRV与enJSRV载量相关性分析[D]. 郭文庆.内蒙古农业大学 2017
[4]绵羊-β防御素-1重组原核表达载体的构建及表达[D]. 严沁.内蒙古农业大学 2016
[5]绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起体内外细胞转化的研究[D]. 石晶.内蒙古农业大学 2016
[6]pcDNA4/myc-His/exJSRV-env转染NIH3T3细胞的研究[D]. 杜方原.内蒙古农业大学 2016
[7]新疆部分地区绵羊肺腺瘤病分子流行病学调査、病理学诊断及全基因组分析[D]. 杨素芳.石河子大学 2015
[8]绵羊肺腺瘤病实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 骆丹.东北农业大学 2013
[9]玉米抗虫蛋白基因原核表达载体构建及活性研究[D]. 林亨咪.黑龙江大学 2013
[10]大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化[D]. 钱丹丹.吉林大学 2011
本文编号：3649291
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
1 引言
1.1 逆转录病毒
1.2 外源绵羊肺腺瘤病毒
1.2.1 JSRV基因表达产物与功能
1.2.2 JSRV生活史
1.3 绵羊肺腺瘤病概况
1.4 绵羊肺腺瘤的检测
1.5 原核表达概述
1.5.1 大肠杆菌表达系统的优缺点
1.5.2 大肠杆菌表达系统的基本概念
1.5.3 表达菌的选择
1.5.4 pET表达系统原理
1.6 WesternBlot技术概述
1.6.1 WesternBlot试验的应用和原理
1.6.2 WesternBlot试验的流程
1.7 研究目的及意义
2 实验一绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因获取与原核表达质粒构建
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.2 方法
2.2.1 引物设计合成及目的片段PCR扩增
2.2.2 pEGFP-C1/exJSRV-env的获取与鉴定
2.2.3 目的基因的扩增
2.2.4 pET-32a载体质粒的制备
2.2.5 原核表达质粒的构建
2.2.6 重组原核表达质粒的鉴定
2.3 结果
2.3.1 pEGFP-C1/exJSRV-env菌落PCR鉴定结果
2.3.2 重组pEGFP-C1/exJSRV-env质粒酶切鉴定结果
2.3.3 重组质粒pET-32a/exJSRV-env菌落PCR鉴定结果
2.3.4 重组质粒pET-32a/exJSRV-env酶切鉴定结果
2.3.5 重组质粒pET-32a/exJSRV-env测序结果
2.4 讨论与小结
3 实验二绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白原核表达
3.1 材料
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.2 方法
3.2.1 绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白的表达
3.2.2 IPTG最佳诱导浓度的确定
3.2.3 重组蛋白可溶性鉴定
3.3 结果
3.3.1 IPTG最佳诱导浓度的SDS-PAGE确定
3.3.2 重组蛋白可溶性鉴定结果
3.4 讨论与小结
4 实验三绵羊肺腺瘤病毒重组囊膜蛋白WesternBlot检测
4.1 材料
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验仪器
4.1.3 实验试剂
4.2 方法
4.3 结果
4.4 讨论与小结
5 结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]exJSRV和enJSRV致瘤机制的研究进展[J]. 杨惠,刘淑英. 中国兽医科学. 2018(04)
[2]Human endogenous retrovirus W env increases nitric oxide production and enhances the migration ability of microglia by regulating the expression of inducible nitric oxide synthase[J]. Ran Xiao,Shan Li,Qian Cao,Xiuling Wang,Qiujin Yan,Xiaoning Tu,Ying Zhu,Fan Zhu. Virologica Sinica. 2017(03)
[3]大约克猪SLA-1原核表达载体的构建及表达[J]. 张秀娟,杨杰,孙永强,高凤山. 中国畜牧兽医. 2016(12)
[4]水牛ghrelin基因原核表达载体构建与蛋白表达[J]. 农微,谢婉,朱思燃,秦津,崔月明,李爱友,谢体三. 畜牧与兽医. 2016(12)
[5]RNA→cDNA——由“2015年高考理综能力测试40（1）题”引发的思考[J]. 王华峰,孙瑞娴,刘国平,郝晶晶. 中学生物学. 2016(12)
[6]FGF20原核表达载体构建及在大肠杆菌中优化表达[J]. 张磊,吕英,宋玉,王会岩. 生物技术. 2016(05)
[7]新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达[J]. 曾国航,徐宏伟,李莲瑞. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(09)
[8]抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化[J]. 王晓晔,石博妹,王英群,李珣,刘徳玉,李铭,李芳芳,胡传活. 华北农学报. 2016(01)
[9]enJSRV囊膜蛋白及其受体的瞬时表达与绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的诱导研究[J]. 张宇飞,石晶,刘淑英. 畜牧兽医学报. 2015(11)
[10]绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立[J]. 刘月,张宇飞,孙晓林,刘淑英. 畜牧兽医学报. 2015(05)
博士论文
[1]外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析[D]. 孙晓林.内蒙古农业大学 2017
[2]绵羊胎盘绒毛膜滋养层细胞中enJSRV囊膜蛋白的细胞生物学作用[D]. 张宇飞.内蒙古农业大学 2016
[3]丝状支原体PG3株和绵羊肺炎支原体内蒙分离株基因组测序及可变表面脂蛋白基因克隆表达[D]. 徐春光.内蒙古农业大学 2013
[4]禾谷镰孢菌Fusarium graminearum α、β2-微管蛋白的原核表达、体外聚合及药物结合研究[D]. 徐建强.南京农业大学 2012
[5]绵羊肺腺瘤病相关基因突变的检测及绵羊、山羊内源性反转录病毒的扩增[D]. 周艳喜.内蒙古农业大学 2012
[6]绵羊肺腺瘤病自然病例和人工感染病例的临床病理学及分子病理学研究[D]. 么宏强.内蒙古农业大学 2006
硕士论文
[1]重组人可溶性Tim-3原核表达载体的构建及其重组蛋白的优化表达[D]. 白少云.广西医科大学 2017
[2]绵羊肺腺瘤病毒斑点杂交检测方法的建立与初步应用[D]. 吴志强.内蒙古农业大学 2017
[3]绵羊肺腺瘤病PCR检测技术的建立及exJSRV与enJSRV载量相关性分析[D]. 郭文庆.内蒙古农业大学 2017
[4]绵羊-β防御素-1重组原核表达载体的构建及表达[D]. 严沁.内蒙古农业大学 2016
[5]绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起体内外细胞转化的研究[D]. 石晶.内蒙古农业大学 2016
[6]pcDNA4/myc-His/exJSRV-env转染NIH3T3细胞的研究[D]. 杜方原.内蒙古农业大学 2016
[7]新疆部分地区绵羊肺腺瘤病分子流行病学调査、病理学诊断及全基因组分析[D]. 杨素芳.石河子大学 2015
[8]绵羊肺腺瘤病实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 骆丹.东北农业大学 2013
[9]玉米抗虫蛋白基因原核表达载体构建及活性研究[D]. 林亨咪.黑龙江大学 2013
[10]大豆CHS8、CHIⅡ、SAI融合基因的原核表达及植物表达载体构建与转化[D]. 钱丹丹.吉林大学 2011
本文编号：3649291
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