非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2022-05-02 20:03

　　2018年8月我国发现非洲猪瘟（African swine fever,ASF）,并在多地蔓延,由于尚无疫苗和有效的治疗方法,病死率高达100%,给养猪业带来巨大的损失。目前控制该病,主要依靠快速、准确的诊断方法,尽早发现、处理,防止扩散。为制备特异性的非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）p54蛋白单克隆抗体,本研究利用大肠杆菌表达ASFV p54蛋白C端胞内区片段,构建能表达ASFV p54蛋白的工程菌E.coli BL21/pET-p54,经IPTG诱导表达可溶性的p54蛋白。用纯化后的可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经4次筛选和3次亚克隆获得了21株分泌ASFV p54蛋白单克隆抗体的细胞株。通过ELISA测定腹水效价,结果均在1︰40 000～1︰5 120 000范围之内。以免疫组织化学染色法鉴定单克隆抗体,结果有9株可以特异性检出ASFV抗原。对免疫组化阳性的单克隆抗体进行亚类鉴定,结果 5株为IgG1,4株为IgG2a。以免疫印迹试验（Western Blot）和间接免疫荧光法（Indirect ... 

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【文章目录】：
材料与方法
    1细胞、病毒及实验动物
    2非洲猪瘟阳性组织标本
    3主要试剂
    4基因合成
    5引物设计
    6表达菌株的构建
    7 p54蛋白的表达、纯化与鉴定
    8动物免疫
    9检测p54抗体的间接ELISA方法
    10细胞融合及筛选
    11单克隆抗体腹水的制备
    12单克隆抗体效价测定
    13单克隆抗体免疫组化鉴定
    14单克隆抗体亚类鉴定
    15单克隆抗体特异性鉴定
        15.1 Western Blot鉴定
        15.2 IFA鉴定
结果
    1 p54胞内区基因的扩增及重组质粒的鉴定
    2 p54蛋白的表达、纯化与鉴定
    3免疫动物血清ELISA效价
    4细胞融合及阳性克隆筛选
    5单克隆抗体腹水的制备及效价测定
    6单克隆抗体免疫组化鉴定
    7单克隆抗体亚类鉴定
    8单克隆抗体特异性鉴定
        8.1 Western Blot鉴定
        8.2 IFA鉴定
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]非洲猪瘟病毒免疫学及疫苗研究进展[J]. 张洪亮,金铭,赵越,王凤雪,马晶,温永俊,单虎.  病毒学报. 2019(03)
[2]非洲猪瘟疫苗研究进展[J]. 何洋,康桦华,冯锈华,向华,陈晶,黄忠,袁子国,王晓虎.  传染病信息. 2019(01)
[3]中国首例非洲猪瘟诊断研究[J]. 王颖,缪发明,陈腾,周鑫韬,李楠,吕宗吉,张静远,刘晔,张国军,张守峰,扈荣良.  病毒学报. 2018(06)
[4]非洲猪瘟流行现状分析及诊断方法研究进展[J]. 祖立闯,李娇,谢金文,李峰,沈志强.  养猪. 2018(05)
[5]非洲猪瘟研究新进展[J]. 邓俊花,林祥梅,吴绍强.  中国动物检疫. 2017(08)



本文编号：3649862