牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型对实验动物致病性的研究

发布时间：2022-05-03 00:22

　　牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征，对养牛业危害严重。牛腺病毒3型与牛副流感病毒3型都是已知的牛呼吸道疾病综合征的重要病原。2009年国内首次报道从黑龙江的分离到一株BAV-3，命名为HLJ0955株。而在2008年本实验室从山东省牛群中首次在国内分离到4株BPIV3，为一新的基因型。由于牛群中BAV-3和BPIV3自然感染非常普遍，导致在进行实验感染时获取合适的实验用牛非常困难。因此，SPF实验动物也许是研究BAV-3和BPIV3致病性的有效动物模型。本研究应用病毒分离、荧光定量PCR和免疫组化检测BAV-3在实验感染BALB/c小鼠和豚鼠中的组织分布。通过滴鼻接毒（104.5TCID50）小鼠以及豚鼠（105.2TCID50），在接毒后不同时间采集肺脏等组织进行相关试验。结果表明BAV-3能够在2周龄小鼠肺脏中有效地复制。IHC结果表明在接毒后第1到第11天能够在肺脏内皮细胞检测到BAV-3抗原。荧光定量PCR能够在接毒小鼠第1到第7天的肺脏中检测到病毒DNA。BAV-3接毒小鼠会造成出血、肺泡内皮细胞增生等病理变化。而在接毒4周龄小鼠体内，肺脏病变程度较轻。所有接毒的豚鼠在... 

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摘要
Abstract
图目录
表目录
英文缩略表
第一章 引言
    牛呼吸道疾病概述
    1.1 牛腺病毒 3 型概述
        1.1.1 牛腺病毒形态结构特征
        1.1.2 BAV-3 基因组结构特征和复制模型
        1.1.3 腺病毒受体方面的研究概述
        1.1.4 腺病毒作为疫苗载体的研究进展
        1.1.5 BAV-3 的流行病学和致病性研究
        1.1.6 BAV-3 的诊断
    1.2 牛副流感病毒 3 型概述
        1.2.1 BPIV3 的生物学特征
        1.2.2 BPIV3 基因组简述
        1.2.3 BPIV3 的流行病学和致病性研究
        1.2.4 BPIV3 的临床症状和病理变化
        1.2.5 BPIV3 的诊断
        1.2.6 BPIV3 的预防
    1.3 本研究的目的和意义
第二章 牛腺病毒 3 型对 BALB/c 小鼠致病性的研究
    摘要
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要试验仪器和材料
        2.1.2 病毒和细胞
        2.1.3 BALB/c 小鼠的 BAV-3 实验感染
        2.1.4 病毒分离和滴度测定
        2.1.5 Real-time PCR 检测
        2.1.6 病理检测和免疫组化检测
        2.1.7 病毒中和试验
    2.2 结果
        2.2.1 感染小鼠病毒分离和滴定
        2.2.2 分离组织的 Real-time PCR 检测
        2.2.3 免疫组化试验检测结果
        2.2.4 病理组织学检测结果
        2.2.5 中和试验检测结果
    2.3 讨论
第三章 牛腺病毒 3 型对豚鼠致病性的研究
    摘要
    3.1 材料与方法
        3.1.1 主要试验仪器和材料
        3.1.2 病毒和细胞
        3.1.3 BAV-3对豚鼠的实验感染
        3.1.4 病毒分离和滴度测定
        3.1.5 Real-time PCR 检测
        3.1.6 病理检测和免疫组化检测
        3.1.7 病毒中和试验
        3.1.8 肺脏分离的 BAV-3 回归豚鼠试验
    3.2 结果
        3.2.1 临床症状和解剖学病理变化
        3.2.2 病毒的分离和滴定
        3.2.3 分离组织的 Real-time PCR 检测
        3.2.4 免疫组化试验检测结果
        3.2.5 病理组织学检测结果
        3.2.6 中和试验检测结果
        3.2.7 肺脏分离的 BAV-3 回归豚鼠试验
    3.3 讨论
第四章 牛副流感病毒 3 型 C 基因型对豚鼠的致病性研究
    摘要
    4.1 材料与方法
        4.1.1 主要试验仪器和材料
        4.1.2 病毒和细胞
        4.1.3 BPIV3 对豚鼠的实验感染
        4.1.4 临床观察和解剖病理检查
        4.1.5 病理检测和免疫组化检测
        4.1.6 病毒分离和滴度测定
        4.1.7 Real-time RT-PCR 检测
        4.1.8 病毒中和试验
    4.2 结果
        4.2.1 临床症状和解剖学变化
        4.2.2 豚鼠解剖学病理变化
        4.2.3 豚鼠接毒 SD0835 后病毒的分离滴定
        4.2.4 豚鼠接毒 SD0835 后病毒载量的 Real-time RT-PCR 测定
        4.2.5 组织病理学检测
        4.2.6 免疫组化检测结果
        4.2.7 病毒特异性中和抗体应答
    4.3 讨论
第五章 牛腺病毒 3 型 Real-time PCR 检测方法的初步建立
    摘要
    5.1 材料与方法
        5.1.1 病毒和细胞
        5.1.2 主要试剂和仪器
        5.1.3 Real-time PCR 引物和探针的设计
        5.1.4 标准品质粒的制备
        5.1.5 Real-time PCR 反应体系的优化
        5.1.6 Real-time PCR 标准曲线的建立
        5.1.7 Real-time PCR 敏感性试验
        5.1.8 Real-time PCR 特异性试验
        5.1.9 Real-time PCR 重复性试验
        5.1.10 临床样品的 Real-time PCR
    5.2 结果
        5.2.1 标准品的制备
        5.2.2 Real-time PCR 反应体系优化结果
        5.2.3 Real-time PCR 标准曲线
        5.2.4 Real-time PCR 敏感性试验结果
        5.2.5 Real-time PCR 重复性试验结果
        5.2.6 临床样品的检测结果
    5.3 讨论
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛副流感病毒3型的分离鉴定[J]. 刘鹏,侯喜林,周玉龙,朴范泽.  微生物学通报. 2009(09)

博士论文
[1]牛副流感病毒3型山东分离株致病性研究及荧光定量RT-PCR的建立[D]. 董秀梅.中国农业科学院 2012



本文编号：3650256