坦布苏病毒山东株SD/02的分离鉴定、DNA疫苗的构建及其免疫效果
发布时间：2022-05-08 13:50
自2010年4月，在中国的许多地区暴发一种以蛋鸭、种鸭产蛋骤然大幅下降为主要临床特征的疾病，病理特征为卵巢的充血、出血、变形和淋巴细胞浸润，肝门管区间隙炎症。经病原的分离鉴定，该病是由坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）引起的一种新的传染性疾病，加强对本病的研究对预防和控制坦布苏病毒感染的发生具有重要意义。本研究对坦布苏病毒山东株SD/02进行了分离鉴定，成功构建了含有坦布苏病毒prM/E基因和CpG-ODN的DNA疫苗并进行了体外瞬时表达和体内接种试验。试验结果表明，所构建的DNA疫苗能够诱导试验鸭产生针对坦布苏病毒的特异性体液免疫和细胞免疫应答，具有良好的免疫保护效果。通过本研究为坦布苏病毒的疫苗研制提供了科学的试验依据，奠定了良好的基础。一、坦布苏病毒山东株SD/02的分离鉴定从疑似感染TMUV病例中分离到一株病毒，采用RT-PCR方法、prM/E序列的测定分析和致病性试验对分离株进行了鉴定。分离毒株RT-PCR鉴定结果显示，PCR产物与预期大小一致，其产物序列与坦布苏病毒标准毒株相应片段核苷酸的同源性达99%。该毒株的鸭胚半数致死量（ELD50）为10-2.67/...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明 中文摘要 Abstract 1 引言
1.1 病原学
1.1.1 坦布苏病毒的分类
1.1.2 坦布苏病毒的生物学特性
1.1.3 坦布苏病毒的基因组结构与同源性分析
1.1.4 坦布苏病毒的主要蛋白
1.2 流行病学研究进展
1.3 临床症状及病理变化
1.4 检测方法研究进展
1.5 防治
1.5.1 综合防治
1.5.2 免疫预防
1.5.3 坦布苏病毒的新型疫苗
1.6 DNA 疫苗
1.6.1 DNA 疫苗简述
1.6.2 DNA 疫苗的发展简史
1.6.3 DNA 疫苗的免疫机制
1.6.4 DNA 疫苗免疫效果的影响因素
1.6.5 DNA 疫苗的优势及应用前景
1.7 研究的目的和意义 2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要材料及试验动物
2.1.2 试验试剂
2.1.3 质粒及受体菌
2.1.4 主要设备及仪器
2.2 方法
2.2.1 主要试剂配制
2.2.2 坦布苏病毒山东株 SD/02 的分离鉴定
2.2.3 坦布苏病毒 DNA 疫苗的构建
2.2.4 坦布苏病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究 3 结果与分析
3.1 坦布苏病毒山东株 SD/02 的分离鉴定
3.1.1 prM/E 基因的克隆及序列分析
3.1.2 鸭胚半数致死量的测定结果（ELD50）
3.1.3 1日龄雏鸭脑内致病指数测定结果（ICPI）
3.1.4 分离株对 12 日龄肉鸭的致病性研究
3.2 坦布苏病毒 DNA 疫苗的构建
3.2.1 坦布苏病毒 prM/E 基因克隆的电泳结果
3.2.2 重组质粒 pVAX1-prM/E-CpG 的鉴定与测序
3.2.3 重组质粒体外表达鉴定
3.3 坦布苏病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究
3.3.1 免疫后不同时间抗体检测结果
3.3.2 免疫后各组的死亡率和相对保护率
3.3.3 各组 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞亚群的百分数及比值变化测定结果
3.3.4 血清生化指标测定结果
3.3.5 细胞因子 IFN-γ和 IL-6 的含量变化 4 讨论 5 结论 参考文献 致谢 硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]密码子优化对鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗免疫应答的增强作用[J]. 徐大伟,李国新,李雪松,李云章,李泽君. 中国兽医科学. 2012(05)
[2]鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗构建及免疫原性的初步研究[J]. 徐大伟,李国新,李雪松,姬希文,李云章,李泽君. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[3]鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 张帅,云涛,叶伟成,邓晓辉,崔言顺,华炯钢,张存,张燕. 浙江农业学报. 2012(01)
[4]鸭黄病毒病研究现状及需要解决的若干问题[J]. 陈秋英,陆新浩,刘鸿,黄建勇,任祖伊,吴勇. 兽医导刊. 2011(11)
[5]鸭黄病毒BZ株的生物学特性研究[J]. 马秀丽,于可响,高凤,李玉峰,黄兵,吴静,秦卓明. 中国家禽. 2011(21)
[6]鸭黄病毒油乳剂灭活疫苗研制及免疫效果测定[J]. 万春和,施少华,傅光华,梁昭平,王斌,程龙飞,李敏,陈红梅,林芳,林建生,王鑫,许芬芬,黄瑜. 养禽与禽病防治. 2011(10)
[7]鸭坦布苏病毒病病原的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 李泽君. 中国家禽. 2011(17)
[8]鸭黄病毒感染研究现状与展望[J]. 吕玲,俞燕. 中国家禽. 2011(17)
[9]鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 姬希文,闫丽萍,颜丕熙,李国新,张七斤,李泽君. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[10]干扰素-α治疗慢性乙型肝炎的疗效观察[J]. 胡旭东,程海林,田德安,曹荣,夏冰,柏涛,甘洪颖,黄少平. 实用肝脏病杂志. 2011(04)
本文编号：3651772
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
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符号说明 中文摘要 Abstract 1 引言
1.1 病原学
1.1.1 坦布苏病毒的分类
1.1.2 坦布苏病毒的生物学特性
1.1.3 坦布苏病毒的基因组结构与同源性分析
1.1.4 坦布苏病毒的主要蛋白
1.2 流行病学研究进展
1.3 临床症状及病理变化
1.4 检测方法研究进展
1.5 防治
1.5.1 综合防治
1.5.2 免疫预防
1.5.3 坦布苏病毒的新型疫苗
1.6 DNA 疫苗
1.6.1 DNA 疫苗简述
1.6.2 DNA 疫苗的发展简史
1.6.3 DNA 疫苗的免疫机制
1.6.4 DNA 疫苗免疫效果的影响因素
1.6.5 DNA 疫苗的优势及应用前景
1.7 研究的目的和意义 2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 主要材料及试验动物
2.1.2 试验试剂
2.1.3 质粒及受体菌
2.1.4 主要设备及仪器
2.2 方法
2.2.1 主要试剂配制
2.2.2 坦布苏病毒山东株 SD/02 的分离鉴定
2.2.3 坦布苏病毒 DNA 疫苗的构建
2.2.4 坦布苏病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究 3 结果与分析
3.1 坦布苏病毒山东株 SD/02 的分离鉴定
3.1.1 prM/E 基因的克隆及序列分析
3.1.2 鸭胚半数致死量的测定结果（ELD50）
3.1.3 1日龄雏鸭脑内致病指数测定结果（ICPI）
3.1.4 分离株对 12 日龄肉鸭的致病性研究
3.2 坦布苏病毒 DNA 疫苗的构建
3.2.1 坦布苏病毒 prM/E 基因克隆的电泳结果
3.2.2 重组质粒 pVAX1-prM/E-CpG 的鉴定与测序
3.2.3 重组质粒体外表达鉴定
3.3 坦布苏病毒 DNA 疫苗的免疫效果研究
3.3.1 免疫后不同时间抗体检测结果
3.3.2 免疫后各组的死亡率和相对保护率
3.3.3 各组 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞亚群的百分数及比值变化测定结果
3.3.4 血清生化指标测定结果
3.3.5 细胞因子 IFN-γ和 IL-6 的含量变化 4 讨论 5 结论 参考文献 致谢 硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]密码子优化对鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗免疫应答的增强作用[J]. 徐大伟,李国新,李雪松,李云章,李泽君. 中国兽医科学. 2012(05)
[2]鸭坦布苏病毒E基因DNA疫苗构建及免疫原性的初步研究[J]. 徐大伟,李国新,李雪松,姬希文,李云章,李泽君. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[3]鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 张帅,云涛,叶伟成,邓晓辉,崔言顺,华炯钢,张存,张燕. 浙江农业学报. 2012(01)
[4]鸭黄病毒病研究现状及需要解决的若干问题[J]. 陈秋英,陆新浩,刘鸿,黄建勇,任祖伊,吴勇. 兽医导刊. 2011(11)
[5]鸭黄病毒BZ株的生物学特性研究[J]. 马秀丽,于可响,高凤,李玉峰,黄兵,吴静,秦卓明. 中国家禽. 2011(21)
[6]鸭黄病毒油乳剂灭活疫苗研制及免疫效果测定[J]. 万春和,施少华,傅光华,梁昭平,王斌,程龙飞,李敏,陈红梅,林芳,林建生,王鑫,许芬芬,黄瑜. 养禽与禽病防治. 2011(10)
[7]鸭坦布苏病毒病病原的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 李泽君. 中国家禽. 2011(17)
[8]鸭黄病毒感染研究现状与展望[J]. 吕玲,俞燕. 中国家禽. 2011(17)
[9]鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 姬希文,闫丽萍,颜丕熙,李国新,张七斤,李泽君. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[10]干扰素-α治疗慢性乙型肝炎的疗效观察[J]. 胡旭东,程海林,田德安,曹荣,夏冰,柏涛,甘洪颖,黄少平. 实用肝脏病杂志. 2011(04)
本文编号：3651772
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