广西类禽型H1N1猪流感病毒分离鉴定和基因序列的测定分析

发布时间：2022-07-07 14:26

　　本研究从广西采集的365份猪棉拭子样品接种鸡胚,收集尿囊液,分离了3株具有血凝活性的流感病毒。用RT-PCR对分离的3株病毒的NA部分基因进行测序分析,鉴定出分离的3株流感病毒均是类禽H1N1猪流感病毒,分别命名G14、G21和G30。通过对G14、G21、G30三株流感病毒的HA基因的进化树分析发现3株病毒和A/swine Zhejiang/1/2007的亲缘性最近。通过对三株病毒的各基因的关键点分析发现：G14、G21、G30三株病毒的氨基酸受体相同,分别是148-152（GVTAA）、167（W）、197（H）、204（D）、208（L）、209（Y）。G14、G21、G30三株流感病毒氨基酸受体和亲缘性最近的A/swine/Hungary/19774/2006和A/swine/Zhejiang/1/2007的氨基酸受体结合位点一致并没有发生变化。G14、G21、G30三株病毒HA1蛋白的氨基酸裂解位点也较为保守,裂解位点为PSIQYR↓GLFGAI,此变异没有碱性氨基酸的存在,不符合高致病性流感毒株的分子特征,且裂解位点周围氨基酸序列非常保守,并且三株毒株均一致。通过对三株分离... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1.1 流感病毒的概述
        1.1.1 流感病毒的发展和分布
        1.1.2 流感病毒的结构
        1.1.3 流感病毒的分类和化学组成
        1.1.4 流感病毒的培养
        1.1.5 流感病毒理化因子的特性
        1.1.6 流感病毒的分子生物学功能和特性
        1.1.7 基因组结构
        1.1.8 流感病毒的遗传变异
    1.2 猪流感的诊断技术
        1.2.1 临床诊断
        1.2.2 实验室诊断技术
        1.2.3 分子生物学检测技术
    1.3 猪流感H1N1(古典H1N1/类禽H1N1/类人H1N1)流行病概述
    1.4 本研究的意义和目的
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 病料和血清来源
        2.1.2 标准血清和抗原
        2.1.3 SPF鸡胚
        2.1.4 实验仪器和试剂
        2.1.5 引物设计与合成
        2.1.6 用于对比的参考毒株
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验技术路线
        2.2.2 H1N1亚型流感病毒的检测
        2.2.3 质粒的提取
        2.2.4 酶切和PCR鉴定
第三章 结果和分析
    3.1 病毒的分离与RT-PCR的检测结果
    3.2 病毒的全基因扩增和克隆
        3.2.1 HA基因的扩增图
        3.2.2 NA基因的扩增图
        3.2.3 M基因的扩增图
        3.2.4 NS基因的扩增图
        3.2.5 NP基因的扩增图
        3.2.6 PB2基因的扩增图
        3.2.7 PB1基因的扩增图
        3.2.8 PA基因的扩增图
    3.3 猪流感病毒G14、G21、G30基因的遗传分析
        3.3.1 G14、G21、G30三株病毒HA基因的分析
        3.3.2 G14、G21、G30三株病毒NA基因的分析
        3.3.3 G14、G21、G30三株病毒NP基因的分析
        3.3.4 G14、G21、G30三株病毒M基因的分析
        3.3.5 G14、G21、G30三株病毒NS基因的分析
        3.3.6 G14、G21、G30三株病毒PA基因的分析
        3.3.7 G14、G21、G30三株病毒PB1基因的分析
        3.3.8 G14、G21、G30三株病毒PB2基因的分析
第四章 讨论
    4.1 猪流感H1N1的流行病学调查
    4.2 HA基因的遗传变异分析
    4.3 NA基因的遗传变异分析
    4.4 PB1、PB2、NS和M基因的遗传变异分析
    4.5 PA蛋白的遗传变异分析
    4.6 NP蛋白的遗传变异分析
第五章 结论
参考文献
致谢



本文编号：3656584