基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ORFV009基因缺失株及其免疫效果评价

发布时间：2022-07-10 14:25

　　羊传染性脓疱病（Contagious Ecthyma）,又被称作羊口疮,是羊传染性脓疱病毒（Orf virus,ORFV）引起导致的绵羊、山羊以及野生小型反刍兽的一种急性、高度接触性传染病。被该病感染的动物的口唇部,乳房部,生殖器官部位等最易受到侵害,在患处出现皮肤破溃,水疱,结痂等。羊传染性脓疱病还是一种人兽共患病,不仅给羊养殖产业造成巨大的经济损失,还同时威胁着相关人员的生命健康。羊传染性脓疱病目前尚无特效治疗药物,接种疫苗是最有效的防控手段。但是由于羊传染性脓疱病毒特有的免疫逃避机制,现在市售的灭活疫苗和弱毒疫苗在免疫保护效果等方面还有许多不足。而基因缺失疫苗作为一种新型疫苗,在羊传染性脓疱病的疫苗开发上拥有非常广阔的前景。同源重组基因敲除技术是常用的构建基因缺失株的方法,但传统的同源重组方法成功率低下,耗费时间极长。在本研究中,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术事先在基因缺失的目标区域引起DNA的双链断裂（DSBs）,使得目标区域发生同源重组的概率大大提高。我们通过PCR扩增,寡核苷酸序列合成,载体连接等方法构建了同源重组穿梭质粒pUC57-vv7.5-EGFP-ORF... 

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词表
前言
第一篇 文献综述
    第1章 羊传染性脓疱病毒研究进展
        1.1 病原学
        1.2 流行病学
        1.3 临床症状
        1.4 诊断
        1.5 防治
    第2章 羊传染性脓疱病毒疫苗研究现状
        2.1 羊传染性脓疱病发病机制研究
        2.2 疫苗研究进展
    第3章 同源重组和CRSPR/Cas9 技术
        3.1 同源重组技术
        3.2 CRISPR/Cas9 系统
第二篇 研究内容
    第1章 基于CRISPR/Cas9 基因编辑技术构建ORFV009基因缺失株
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
        1.3 实验结果
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 ORFV009基因缺失株对羔羊的免疫效果评价
        2.1 实验材料
        2.2 实验方法
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
致谢



本文编号：3657849