Phix174噬菌体E蛋白的靶蛋白MraY和辅助蛋白SlyD的表达以及单抗的制备

发布时间：2022-07-15 18:19

　　phix174噬菌体E基因编码的蛋白可以抑制靶蛋白MraY的活性,但还不能确定E蛋白与靶蛋白MraY的相互作用是在MraY的活性位点还是通过跨膜区某个位点,也不能确辅助蛋白SlyD在裂解过程中的明确作用。因此两种蛋白的研究为揭示三者之间的互作奠定基础。本研究以大肠杆菌DNA为模板,采用PCR方法扩增出591bp的SlyD基因,经限制性内切酶BamH Ⅰ、 Sal Ⅰ双酶切后,与pGEX-6P-1载体连接,转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,重组质粒双酶切鉴定和测序均正确的阳性重组菌经1mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白SlyD,并纯化后经Western-blot分析鉴定重组蛋白SlyD的免疫学活性。结果表明,在47ku大小位置有明显的目的条带,说明SlyD蛋白成功表达并得以纯化。本研究以大肠杆菌DNA为模板,采用重叠PCR的方法扩增出195bp的MraY的亲水区嵌合片段AB,经限制性内切酶BamH Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切后,与pGEX-6P-1载体连接,转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,重组质粒双酶切鉴定和测序均正确的阳性重组菌经1mmol/L IPTG诱导表达... 

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
绪论
    1.1 研究的主要内容
    1.2 研究的目的和意义
第一篇 文献综述
    第一章 噬菌体概述
        1.1 噬菌体的概述
        1.2 噬菌体的生物学特性
        1.3 噬菌体制剂的研究进展
    第二章 E蛋白及其靶蛋白和辅助蛋白
        2.1 噬菌体裂解E蛋白的概述
        2.2 靶蛋白MraY的概述
        2.3 辅助蛋白SlyD的概述
    第三章 原核表达系统的研究进展
        3.1 原核表达系统
        3.2 原核表达系统的优缺点
        3.3 影响原核表达效率的因素
第二篇 研究内容
    第一章 SlyD蛋白的表达和纯化
        1.1 材料和方法
        1.2 结果
        1.3 讨论
        1.4 小结
    第二章 MraY的嵌合片段AB蛋白的表达及纯化
        2.1 材料和方法
        2.2 结果
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 抗SlyD和MraY的单克隆抗体的制备
        3.1 材料和方法
        3.2 结果
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组蛋白表达系统的研究进展[J]. 范翠英,冯利兴,樊金玲,果德安,刘璇.  生物技术. 2012(02)
[2]大肠杆菌噬菌体治疗制剂的研究进展[J]. 李冰,唐峰.  黑龙江畜牧兽医. 2011(13)
[3]噬菌体制剂的研究现状及发展前景[J]. 赵庆友,朱瑞良.  中国兽药杂志. 2010(07)
[4]菌影疫苗的研究进展[J]. 李书光,邵明杰,沈志强.  中国兽医杂志. 2009(11)
[5]菌影及其递送载体的研究与应用[J]. 孙颖,金天明.  安徽农业科学. 2009(21)
[6]大肠杆菌“菌影”的制备[J]. 彭玮,王聃,刘思国,常月红,王春来,刘慧芳,司薇,赫明雷,杜艳芬.  东北农业大学学报. 2009(06)
[7]细菌菌蜕的研究进展[J]. 蔡昆,王慧.  中国生物制品学杂志. 2009(03)
[8]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备[J]. 常月红,刘思国,王春来,刘慧芳,司薇,彭玮,王聃,赫明雷,杜艳芬.  中国预防兽医学报. 2008(09)
[9]噬菌体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备[J]. 王丽哲,雷连成,韩文瑜.  吉林农业大学学报. 2008(02)
[10]基因表达系统研究进展[J]. 孙柏欣,刘长远,陈彦,赵华,赵彤华,李柏宏.  现代农业科技. 2008(02)



本文编号：3662596