马巨噬细胞表面分子CD63的表达及单克隆抗体的制备

发布时间：2022-07-16 19:47

　　巨噬细胞是机体免疫系统的重要组成部分,也是病毒感染的靶细胞之一,其表面分子多种多样,研究其表面分子的相互作用对研究病毒有非常重大的意义,为了探讨马传染病病毒与巨噬细胞的免疫相互作用,制备具有特异性识别蛋白的单克隆抗体就显得尤为重要。其中CD63是巨噬细胞的表面蛋白,也是四跨膜蛋白家族的一员,其本身具有四个结构域,共717个碱基,编码239个氨基酸,其理论分子量为25.6kDA,经信号肽分析网站分析,该区并无信号肽,且具有四次跨膜结构。已经证实该蛋白在HIV-1在人巨噬细胞中的复制具有重要作用,且在人黑色素瘤中CD63起着肿瘤抑制的作用。本研究为获得特异性的马CD63单克隆抗体,通过原核以及真核表达系统表达和纯化CD63蛋白,并通过DNA免疫方式免疫动物,刺激其产生免疫应答反应,最终制备出CD63特异性的单克隆抗体。在研究过程中发现CD63全长无法在体外获得表达,经跨膜区软件分析后,去掉跨膜区的序列,选取CD63序列297个碱基的胞外区（截短的CD63）进行原核表达,经条件优化后成功获得可溶性的蛋白,但因蛋白表达量少导致纯化困难。进一步采用了真核表达的方式,重组质粒构建的策略是将具有诱导... 

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 四次跨膜蛋白家族与CD63
        1.1 四次跨膜蛋白家族
        1.2 CD63
        1.3 CD63 在细胞表面的表达
        1.4 CD63 在细胞内转运的作用
        1.5 CD63 和癌症
        1.6 CD63与HIV
第二篇 研究内容
    第一章 马CD63的原核表达及纯化
        1.1 材料与试剂
        1.2 试验方法
        1.3 结果
        1.4 讨论
    第二章 马CD63 的真核表达及纯化
        2.1 材料与试剂
        2.2 试验方法
        2.3 结果
        2.4 讨论
    第三章 马CD63 单克隆抗体的制备
        3.1 材料与主要试剂
        3.2 试验方法
        3.3 结果
        3.4 讨论
结论
参考文献
缩略词
作者简介
致谢



本文编号：3663171