YY1基因对水牛植入前胚胎DNA甲基化影响的初步研究

发布时间：2022-08-02 16:24

　　阴阳因子1（YY1）是一种广泛存在于生物体中并在进化上高度保守的转录因子,它可以作为基因表达过程中的激活因子和抑制因子参与许多基因的转录调控。为了解YY1基因在水牛植入前胚胎中的表达规律及其对DNA甲基化的影响和调控作用,本研究克隆了水牛YY1基因编码序列,构建了其真核表达载体；筛选抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段,同时探讨了YY1基因过表达对水牛胚胎早期发育及DNA甲基化的影响。1.水牛YYl基因CDS全长序列克隆及其真核表达载体构建。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR和降落PCR的方法,扩增水牛YY1基因CDS全长序列。将目的片段连接到pEGFP-N1载体中构建真核表达载体,然后转染293T细胞和水牛成纤维细胞（BFF）,通过荧光观察和qRT-PCR方法检测YY1基因表达情况。结果显示,克隆得到的水牛YY1基因CDS全长序列为1248bp,与牛、人、小鼠、大鼠及鸡的同源性达到90%以上。重组质粒pYY1-EGFP-N1可在293T细胞和水牛成纤维细胞中表达；在水牛体细胞水平上,YY1基因表达可促进DNMT1基因的表达。2.水牛YY1基因表达shRNA干扰片段... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略词
第一部分 文献综述
    第一章 YY1基因概述
        1. YY1基因简介
        2. YY1基因结构
        3. YY1基因的转录调控功能
            3.1 YY1基因介导的转录抑制作用
            3.2 YY1基因介导的转录激活作用
        4. YY1基因在哺乳动物发育过程中的作用
            4.1 YY1基因与配子生成、胚胎发育的关系
            4.2 YY1基因与细胞增殖、分化及凋亡的关系
        5. YY1基因与表观遗传修饰
            5.1 DNA甲基化与组蛋白甲基化、乙酰化
            5.2 YY1基因与DNA甲基化和组蛋白修饰
        6. 课题研究目的及意义
第二部分 试验研究
    第二章 水牛YY1基因表达载体构建及shRNA片段筛选
        第一节 水牛YY1基因克隆及其真核表达载体的构建
            摘要
            1. 材料与方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 结果
                2.1 水牛YY1基因克隆与测序分析
                2.2 水牛YY1基因真核表达载体构建
                2.3 YY1基因真核表达载体检测
            3 分析与讨论
            4 结论
        第二节 水牛YY1基因shRNA片段的筛选
            摘要
            1 材料与方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 结果
                2.1 水牛YY1shRNA重组质粒的鉴定
                2.2 YY1 shRNA抑制效率检测
                2.3 Western-blot分析shRNA抑制效率
            3 分析与讨论
            4 结论
    第三章 YY1基因过表达对水牛早期胚胎发育及DNA甲基化的影响
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 质粒浓度对水牛受精卵胞质注射法转基因效率的影响
            2.2 注射不同外源DNA对水牛胚胎发育及囊胚形成率影响
            2.3 YY1基因过表达对植入前胚胎DNMT1基因表达影响
        3 分析与讨论
        4 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文



本文编号：3668852