Fosl2和Leptin基因的克隆及其在豫南黑猪不同组织内表达规律的研究

发布时间：2022-08-04 14:40

　　Fosl2（Fos-like antigen2）属于活化因子蛋白1（activator protein-1,AP1）转录因子家族中的一种，在多种组织中均有显著表达，对哺乳动物的生长发育、生殖性状、免疫应答等方面起到重要的作用。近年来，随着研究的深入，人们发现Fosl2基因与脂肪代谢、骨骼发育以及疾病和癌症的发生有着重要联系；Leptin基因是人们最早发现的调节能量代谢的基因。本研究在实验室前期工作的基础上，以豫南黑猪为试验材料，对Fosl2和Leptin进行克隆测序及生物学信息分析，研究了豫南黑猪在不同发育时期及不同组织中的发育差异性表达，以期探索Fosl2和Leptin在猪不同发育阶段中所起的作用，从基因角度阐明豫南黑猪的组织表达谱规律。根据NCBI中GenBank已经公布的人、鼠、牛和大猩猩Fosl2的mRNA序列，利用计算机软件DNAstar进行基因序列的同源性比对，找出不同物种之间Fosl2基因cDNA的保守区域后设计特异性引物，采用RT-PCR技术克隆基因，利用克隆的碱基序列作为探针在NCBI中进行同源性比对，利用生物信息学软件对两种基因的氨基酸结构和序列特征进行分析和预测，... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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致谢
目录
摘要
Abstract
第零部分 文献综述
    0.1 Fosl2 基因的研究进展及应用
        0.1.1 Fosl2 的基因定位与结构
        0.1.2 Fosl2 基因的组织表达分布
        0.1.3 Fosl2 的功能研究
        0.1.4 展望
    0.2 Fosl2 基因与 Leptin 基因在脂肪代谢中的联系
    0.3 Leptin 基因的研究进展
        0.3.1 Leptin 的发现
        0.3.2 Leptin 基因的结构与定位
        0.3.3 Leptin 的功能
        0.3.4 小结
    0.4 实时荧光定量 PCR 技术
        0.4.1 实时荧光定量 PCR 原理
        0.4.2 荧光定量 PCR 的定量方法
        0.4.3 实时荧光定量 PCR 技术的应用
第一部分 引言
第二部分 豫南黑猪 Fosl2基因的克隆、生物学信息分析与组织表达
    第一章 豫南黑猪 Fosl2基因的克隆与生物信息分析
        2.1 基因克隆试验材料
            2.1.1 菌株和克隆载体
            2.1.2 试验动物组织样
            2.1.3 主要仪器和设备
            2.1.4 主要试剂和溶液
        2.2 试验方法和步骤
            2.2.1 PCR 引物设计和合成
            2.2.2 动物组织总 RNA 的提取
            2.2.3 RT-PCR 扩增 Fosl2 部分序列
            2.2.4 DNA 琼脂糖凝胶电泳
            2.2.5 cDNA 的克隆及重组质粒的筛选鉴定
        2.3 结果
            2.3.1 总 RNA 的提取结果
            2.3.2 反转录反应中内参基因的扩增
            2.3.3 RT-PCR 扩增结果
            2.3.4 阳性克隆的筛选和鉴定
            2.3.5 RT-PCR 产物的测序
            2.3.6 豫南黑猪 Fosl2 基因 CDS 序列的多物种比较
            2.3.7 豫南黑猪 Fosl2 基因 CDS 的生物信息学分析及其比较
    第二章 豫南黑猪 Fosl2 基因在不同组织以及不同时期的表达分析
        2.4 材料与方法
            2.4.1 试验动物和样品准备
            2.4.2 主要仪器和试剂
            2.4.3 RNA 提取和 cDNA 合成
            2.4.4 PCR 引物设计与扩增条件优化
            2.4.5 实时荧光定量 PCR 的表达分析
        2.5 结果与分析
            2.5.1 RNA 的纯度与完整性
            2.5.2 荧光定量 PCR 扩增曲线和溶解曲线
            2.5.3 豫南黑猪不同发育时期 Fosl2 基因的组织表达研究
        2.6 讨论
        2.7 小结
第三部分 豫南黑猪Leptin基因的克隆、生物学信息分析与组织表达
    第一章 豫南黑猪Leptin基因的克隆与生物信息分析
        3.1 基因克隆实验材料
        3.2 材料与方法
            3.2.1 PCR引物设计和合成
            3.2.2 动物组织总RNA的提取
            3.2.3 RT-PCR扩增Leptin部分序列
            3.2.4 DNA 琼脂糖凝胶电泳
            3.2.5 cDNA 的克隆及重组质粒的筛选鉴定
        3.3 结果
            3.3.1 总RNA的提取结果
            3.3.2 反转录反应中内参基因的扩增
            3.3.3 RT-PCR扩增结果
            3.3.4 阳性克隆的筛选和鉴定
            3.3.5 RT-PCR产物的测序
            3.3.6 豫南黑猪Leptin基因CDS序列的多物种比较
            3.3.7 电子克隆豫南黑猪 Leptin 基因 CDS 序列的生物信息学分析
    第二章 豫南黑猪 Leptin 基因在不同组织及不同时期的表达分析
        3.4 材料与方法
        3.5 结果与分析
            3.5.1 RNA 的纯度与完整性
            3.5.2 荧光定量 PCR 扩增曲线和溶解曲线
            3.5.3 不同组织不同时期 Leptin 基因 mRNA 水平的差异比较
            3.5.4 Fosl2 基因和 Leptin 基因在豫南黑猪不同发育时期的组织表达特点比较
        3.6 讨论
        3.7 小结
第四部分 结论
第五部分 创新点及下一步的工作展望
参考文献



本文编号：3669729