猪骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定及其生物学特性

发布时间：2022-08-04 16:56

　　【目的】建立猪骨骼肌卫星细胞体外分离、纯化及鉴定的方法,并对其生物学特性进行探讨,为进一步研究猪肌肉生长发育提供良好的细胞模型。【方法】选取1日龄仔猪背最长肌为材料,无菌状态下将背最长肌剪碎为肉糜状。此后采用浓度为0.2%的Ⅰ型胶原酶消化90 min,再加入浓度为0.25%的胰蛋白酶37℃联合消化30 min。经终止消化、过滤、重悬后将分离得到的细胞置于37℃、5%CO₂细胞培养箱中培养。选用反复差速贴壁法对骨骼肌卫星细胞进行纯化,第一次纯化选择在细胞接种2 h后,将未贴壁细胞转移至新培养皿。上清液继续培养18 h后,对卫星细胞进行第二次差速贴壁纯化。当细胞密度达70%—80%时可对细胞进行传代或冻存处理。利用细胞免疫荧光技术检测P2代卫星细胞标志基因Pax7、MyoD的蛋白表达情况,并绘制卫星细胞生长曲线。分别添加不同诱导分化液使卫星细胞定向分化为肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞,检测成肌分化标志基因MHC的免疫荧光,鉴定卫星细胞肌管形成情况;油红O染色及油红O定量鉴定卫星细胞诱导成脂分化效果;茜素红染色鉴定卫星细胞成骨分化能力,qRT-PCR检测成肌、成脂、成骨进程... 

【文章页数】：13 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
        1.1.1 试验动物
        1.1.2 主要试剂
    1.2 骨骼肌卫星细胞的分离及纯化
    1.3 骨骼肌卫星细胞的传代与冻存
    1.4 骨骼肌卫星细胞的免疫荧光染色鉴定
    1.5 骨骼肌卫星细胞生长曲线
    1.6 骨骼肌卫星细胞成肌诱导及鉴定
    1.7 骨骼肌卫星细胞成脂诱导及鉴定
    1.8 骨骼肌卫星细胞成骨诱导及鉴定
    1.9 RNA提取及相关基因q RT-PCR检测
    1.1 0 数据分析
2 结果
    2.1 骨骼肌卫星细胞形态学观察
    2.2 骨骼肌卫星细胞免疫荧光鉴定
    2.3 骨骼肌卫星细胞生长曲线
    2.4 骨骼肌卫星细胞成肌诱导
    2.5 骨骼肌卫星细胞成脂诱导
    2.6 骨骼肌卫星细胞成骨诱导
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊胎儿肌肉干细胞的分离培养与成肌诱导分化[J]. 睢梦华,郑琪,吴昊,丁建平,刘勇,李文雍,储明星,张子军,凌英会.  中国农业科学. 2018(08)
[2]New insights into the epigenetic control of satellite cells[J]. Viviana Moresi,Nicoletta Marroncelli,Sergio Adamo.  World Journal of Stem Cells. 2015(06)
[3]高糖诱导山羊骨骼肌卫星细胞成脂分化过程中相关基因表达的变化[J]. 薛科,王林杰,陈利,王薏琳,仲涛,李利,张红平.  畜牧兽医学报. 2014(05)
[4]北京油鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养、鉴定及成肌诱导分化的研究[J]. 李方华,侯玲玲,马月辉,庞全海,关伟军.  中国农业科学. 2010(22)



本文编号：3669923