XBP1在卵巢颗粒细胞及子宫内膜功能调节中的作用研究
发布时间：2022-08-08 18:02
卵巢颗粒细胞功能的发挥和子宫内膜细胞的功能调节是卵泡发育和胚胎附植的关键。近年的研究发现内质网应激广泛参与卵泡发育和闭锁,胚胎附植、生长发育和子宫内膜的蜕膜化等雌性生殖过程。X框结合蛋白1（XBP1）是一种碱性亮氨酸拉链（bZIP）蛋白,为CREB/ATF转录因子家族中的一员。在内质网应激中被IRE1剪切激活之后,通过内质网相关降解途径,恢复内质网稳态。它不仅在未折叠的蛋白质反应中起关键作用,而且作为转录激活因子广泛参与细胞分化、增殖、凋亡,细胞应激反应和其他信号通路。本研究利用免疫组化,RNA干扰技术,流式细胞仪,western blot,实时荧光定量PCR,细胞计数试剂盒（CCK8）和ELISA等方法检测了:（1）类固醇激素对XBP1在小鼠子宫中表达的调控作用;（2）XBP1对类固醇激素合成分泌及颗粒细胞相关功能影响。（3）植物雌激素赤霉烯酮对子宫内膜上皮细胞XBP1和内质网应激调控的影响。主要结果如下:1.在小鼠发情周期中,XBP1主要表达分布于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞中,而且在发情期和间情期的表达量最高。通过类固醇激素处理模型发现,外源性雌激素可刺激XBP1在小鼠子宫腔上皮及...
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
文献综述
第一章 类固醇激素和雌性哺乳动物生殖
1.1 类固醇激素的生成
1.2 类固醇激素
1.2.1 雌激素
1.2.2 雌激素受体
1.2.3 孕酮
1.2.4 孕酮受体
1.3 类固醇激素在发情周期及早期妊娠中的调节变化
第二章 内质网应激和雌性哺乳动物生殖
2.1 内质网应激和未折叠蛋白反应
2.2 内质网应激和细胞凋亡
2.3 卵泡发育和闭锁
2.3.1 卵泡发育
2.3.2 卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡
2.3.3 内质网应激与卵泡闭锁,颗粒细胞凋亡
2.4 内质网应激与雌性动物生殖
2.5 XBP1的结构和功能
2.5.1 XBP1的发现及结构特点
2.5.2 XBP1的生物学功能
实验研究
第三章 雌激素与孕酮对XBP1表达的调节
3.1 材料和仪器设备
3.1.1 材料和试剂
3.1.2 仪器设备
3.1.3 试验动物
3.2 试验方法
3.2.1 小鼠发情周期的鉴定
3.2.2 小鼠的激素处理
3.2.3 小鼠子宫内膜基质细胞的分离培养
3.2.4 Western blot分析
3.2.5 石蜡切片的制备和免疫组化
3.2.6 荧光定量PCR检测
3.3 结果
3.3.1 小鼠发情周期的鉴定
3.3.2 XBP1在小鼠发情周期子宫中的定位表达
3.3.3 western blot检测发情周期过程中XBP1在小鼠子宫内表达
3.3.4 免疫组化分析类固醇激素调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.5 Western blot分析类固醇激素对小鼠子宫中XBP1的表达调控
3.3.6 免疫组化分析E_2调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.7 Western blot分析E_2调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.8 免疫组化分析E_2拮抗剂对XBP1在小鼠子宫中表达的调节
3.3.9 Western blot分析E_2拮抗剂对XBP1在小鼠子宫中表达的调节
3.3.10 小鼠子宫内膜基质细胞中P_4对XBP1表达的调节
3.3.11 P_4拮抗剂对XBP1在小鼠子宫内膜基质细胞内表达的调节
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 小鼠XBP1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.1 材料和仪器设备
4.1.1 材料和试剂
4.1.2 仪器和设备
4.2 方法
4.2.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.2.3 慢病毒载体的包装
4.2.4 XBP1干扰慢病毒滴度测定
4.2.5 XBP1-shRNA干扰片段的筛选
4.3 结果
4.3.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.3.2 XBP1基因慢病毒干扰载体转染HEK293T细胞
4.3.3 病毒滴度测定
4.3.4 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒感染NIH3T3细胞
4.3.5 XBP1shRNA有效靶点的筛选
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 XBP1在小鼠卵巢颗粒细胞中的功能研究
5.1 材料和仪器设备
5.1.1 材料和试剂
5.1.2 主要仪器
5.1.3 试验动物
5.2 实验方法
5.2.1 小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养
5.2.2 XBP1-shRNA慢病毒颗粒的包装及浓缩
5.2.3 XBP1-shRNA慢病毒感染小鼠卵巢颗粒细胞
5.2.4 小鼠卵巢颗粒细胞的RT-q PCR检测
5.2.5 小鼠卵巢颗粒细胞的western blot检测
5.2.6 小鼠卵巢颗粒细胞分泌类固醇激素检测
5.2.7 小鼠卵巢颗粒细胞周期检测
5.2.8 小鼠卵巢颗粒细胞凋亡检测
5.2.9 小鼠卵巢颗粒细胞增殖检测
5.3 结果
5.3.1 XBP1-shRNA慢病毒转染小鼠卵巢颗粒细胞
5.3.2 XBP1-shRNA对激素分泌的影响
5.3.3 XBP1-shRNA对颗粒细胞周期与增殖的影响
5.3.4 XBP1-shRNA对颗粒细胞凋亡的影响
5.3.5 XBP1-shRNA干扰对颗粒细胞功能基因的影响
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 XBP1及内质网应激在赤霉烯酮引起的山羊子宫内膜上皮细胞凋亡和炎症中的作用
6.1 材料和仪器设备
6.1.1 细胞
6.1.2 材料和试剂
6.1.3 仪器和设备
6.2 实验方法
6.2.1 山羊EECs的培养
6.2.2 ZEA对山羊EECs活力的影响
6.2.3 ZEA对山羊EECs凋亡的影响
6.2.4 ZEA对EECs中炎症细胞因子分泌的影响
6.2.5 山羊EEC的RT-qPCR检测
6.2.6 山羊EECs的western blot检测
6.3 结果
6.3.1 ZEA对EECs活力的影响
6.3.2 ZEA诱导EECs凋亡
6.3.3 ZEA对EECs中炎症细胞因子和NF-κB表达的影响
6.3.4 ZEA对EECs中内质网应激及XBP1表达的影响
6.3.5 4-PBA降低ZEA诱导的内质网应激蛋白表达的增加
6.3.6 4-PBA对EECs中ZEA诱导的细胞凋亡的影响
6.3.7 4-PBA对EECs中ZEA诱导的炎症的影响
6.4 讨论
6.5 小结
结论
创新点
进一步研究
参考文献
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Apoptosis and Expression of Protein TRAIL in Granulosa Cells of Rats with Polycystic Ovarian Syndrome[J]. 张娟,朱桂金,王昕荣,徐蓓,胡琳莉. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2007(03)
本文编号：3671976
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
文献综述
第一章 类固醇激素和雌性哺乳动物生殖
1.1 类固醇激素的生成
1.2 类固醇激素
1.2.1 雌激素
1.2.2 雌激素受体
1.2.3 孕酮
1.2.4 孕酮受体
1.3 类固醇激素在发情周期及早期妊娠中的调节变化
第二章 内质网应激和雌性哺乳动物生殖
2.1 内质网应激和未折叠蛋白反应
2.2 内质网应激和细胞凋亡
2.3 卵泡发育和闭锁
2.3.1 卵泡发育
2.3.2 卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡
2.3.3 内质网应激与卵泡闭锁,颗粒细胞凋亡
2.4 内质网应激与雌性动物生殖
2.5 XBP1的结构和功能
2.5.1 XBP1的发现及结构特点
2.5.2 XBP1的生物学功能
实验研究
第三章 雌激素与孕酮对XBP1表达的调节
3.1 材料和仪器设备
3.1.1 材料和试剂
3.1.2 仪器设备
3.1.3 试验动物
3.2 试验方法
3.2.1 小鼠发情周期的鉴定
3.2.2 小鼠的激素处理
3.2.3 小鼠子宫内膜基质细胞的分离培养
3.2.4 Western blot分析
3.2.5 石蜡切片的制备和免疫组化
3.2.6 荧光定量PCR检测
3.3 结果
3.3.1 小鼠发情周期的鉴定
3.3.2 XBP1在小鼠发情周期子宫中的定位表达
3.3.3 western blot检测发情周期过程中XBP1在小鼠子宫内表达
3.3.4 免疫组化分析类固醇激素调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.5 Western blot分析类固醇激素对小鼠子宫中XBP1的表达调控
3.3.6 免疫组化分析E_2调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.7 Western blot分析E_2调节XBP1在小鼠子宫中的表达
3.3.8 免疫组化分析E_2拮抗剂对XBP1在小鼠子宫中表达的调节
3.3.9 Western blot分析E_2拮抗剂对XBP1在小鼠子宫中表达的调节
3.3.10 小鼠子宫内膜基质细胞中P_4对XBP1表达的调节
3.3.11 P_4拮抗剂对XBP1在小鼠子宫内膜基质细胞内表达的调节
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 小鼠XBP1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.1 材料和仪器设备
4.1.1 材料和试剂
4.1.2 仪器和设备
4.2 方法
4.2.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.2.3 慢病毒载体的包装
4.2.4 XBP1干扰慢病毒滴度测定
4.2.5 XBP1-shRNA干扰片段的筛选
4.3 结果
4.3.1 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒干扰载体的构建
4.3.2 XBP1基因慢病毒干扰载体转染HEK293T细胞
4.3.3 病毒滴度测定
4.3.4 pCD513B-U6-XBP1-shRNA慢病毒感染NIH3T3细胞
4.3.5 XBP1shRNA有效靶点的筛选
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 XBP1在小鼠卵巢颗粒细胞中的功能研究
5.1 材料和仪器设备
5.1.1 材料和试剂
5.1.2 主要仪器
5.1.3 试验动物
5.2 实验方法
5.2.1 小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养
5.2.2 XBP1-shRNA慢病毒颗粒的包装及浓缩
5.2.3 XBP1-shRNA慢病毒感染小鼠卵巢颗粒细胞
5.2.4 小鼠卵巢颗粒细胞的RT-q PCR检测
5.2.5 小鼠卵巢颗粒细胞的western blot检测
5.2.6 小鼠卵巢颗粒细胞分泌类固醇激素检测
5.2.7 小鼠卵巢颗粒细胞周期检测
5.2.8 小鼠卵巢颗粒细胞凋亡检测
5.2.9 小鼠卵巢颗粒细胞增殖检测
5.3 结果
5.3.1 XBP1-shRNA慢病毒转染小鼠卵巢颗粒细胞
5.3.2 XBP1-shRNA对激素分泌的影响
5.3.3 XBP1-shRNA对颗粒细胞周期与增殖的影响
5.3.4 XBP1-shRNA对颗粒细胞凋亡的影响
5.3.5 XBP1-shRNA干扰对颗粒细胞功能基因的影响
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 XBP1及内质网应激在赤霉烯酮引起的山羊子宫内膜上皮细胞凋亡和炎症中的作用
6.1 材料和仪器设备
6.1.1 细胞
6.1.2 材料和试剂
6.1.3 仪器和设备
6.2 实验方法
6.2.1 山羊EECs的培养
6.2.2 ZEA对山羊EECs活力的影响
6.2.3 ZEA对山羊EECs凋亡的影响
6.2.4 ZEA对EECs中炎症细胞因子分泌的影响
6.2.5 山羊EEC的RT-qPCR检测
6.2.6 山羊EECs的western blot检测
6.3 结果
6.3.1 ZEA对EECs活力的影响
6.3.2 ZEA诱导EECs凋亡
6.3.3 ZEA对EECs中炎症细胞因子和NF-κB表达的影响
6.3.4 ZEA对EECs中内质网应激及XBP1表达的影响
6.3.5 4-PBA降低ZEA诱导的内质网应激蛋白表达的增加
6.3.6 4-PBA对EECs中ZEA诱导的细胞凋亡的影响
6.3.7 4-PBA对EECs中ZEA诱导的炎症的影响
6.4 讨论
6.5 小结
结论
创新点
进一步研究
参考文献
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Apoptosis and Expression of Protein TRAIL in Granulosa Cells of Rats with Polycystic Ovarian Syndrome[J]. 张娟,朱桂金,王昕荣,徐蓓,胡琳莉. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2007(03)
本文编号：3671976
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