牛奶中抗生素残留检测指示菌的筛选鉴定及检测试剂盒研发

发布时间：2022-08-11 12:56

　　依据微生物抑制法研制的检测牛奶中抗生素残留的试剂盒,因其使用方法简便而被广泛应用。目前试剂盒中的指示菌普遍采用嗜热脂肪芽孢杆菌。本研究以营养需求低、短时间内生长产酸、对常用抗生素敏感为基本原则,从高温环境中分离高温菌。以期分离得到符合试剂盒指示菌要求的菌株,并依据微生物抑制法原理,采用分离的菌株研发试剂盒。主要研究内容及结果如下：1)菌株的分离。从福州市晋安区洗涤厂排热口采集样品,将采集的水样和泥样混合并离心,处理后的混合液涂布于固体培养基中,置于55℃恒温培养箱中培养。依据菌落特征挑取生长较快的单菌落。初步分离纯化得到8株菌。2)菌株的筛选鉴定。依据能够在短时间内使培养液pH值降低、在简单的牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好、对常用抗生素敏感三个指标,对8株菌进行复筛,得到一株目标菌株FZ。经过16S rDNA序列分析,结合菌落形态、菌体形态、芽孢形态分析,确定菌株FZ属于厌氧杆菌属（Anoxybacillus）。3)试剂盒制备及参数优化。在单因素试验的基础上对包埋营养物进行优化,得出最佳包埋物为：0.3%葡萄糖、0.2%蛋白胨、0.1%牛肉膏；考察三种指示剂显色情况,确定溴甲酚紫作为最佳... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 牛奶产业链中抗生素残留现状
        1.1.1 抗生素残留途径
        1.1.2 抗生素残留种类
        1.1.3 抗生素残留危害
        1.1.4 最大残留量规定
    1.2 检测方法研究进展
        1.2.1 微生物检测法
        1.2.2 酶联免疫法
        1.2.3 理化检测法
        1.2.4 免疫传感器法
    1.3 本课题选题依据、主要研究内容与创新点
        1.3.1 选题依据
        1.3.2 主要研究内容
        1.3.3 创新点
第二章 指示菌的筛选
    2.1 试验仪器、材料与试剂
        2.1.1 仪器
        2.1.2 材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 样品采集及处理
        2.2.2 分离菌株产酸及生长情况测定
        2.2.3 药敏试验
    2.3 结果
        2.3.1 采样地环境
        2.3.2 分离菌株的生长曲线及产酸特性
        2.3.3 药敏试验结果
    2.4. 讨论
第三章 指示菌株的鉴定
    3.1 试验仪器、材料与试剂
        3.1.1 试验仪器
        3.1.2 试验材料
        3.1.3 试剂及配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 菌体形态特征及生长特性
        3.2.2 菌体分子鉴定
        3.2.3 重组质粒的构建
        3.2.4 序列分析及系统发育树构建
    3.3 结果与分析
        3.3.1 FZ菌体形态特征及生长特性
        3.3.2 分离菌体16S rDNA序列分析
    3.4讨论
第四章 检测抗生素残留试剂盒的制备
    4.1 试验材料
        4.1.1 培养基
        4.1.2 试剂及配制
    4.2 试验方法
        4.2.1 产芽孢培养基的筛选及优化
        4.2.2 芽孢的收集
        4.2.3 抗生素残留样品的制备
        4.2.4 试剂盒制备流程
        4.2.5 试剂盒参数的优化
    4.3 结果与分析
        4.3.1 产芽孢培养基的筛选及优化
        4.3.2 包埋琼脂营养物质正交实验设计
        4.3.3 包埋营养物质中指示剂的选择
        4.3.4 芽孢最佳包埋浓度的确定
        4.3.5 最佳牛乳添加量的确定
    4.4 讨论
第五章 试剂盒的应用
    5.1 试验材料
    5.2 试验方法
        5.2.1 试剂盒检测线确定
        5.2.2 试剂盒均一度测试
        5.2.3 试剂盒的应用
    5.3 结果分析
        5.3.1 试剂盒检测限确定
        5.3.2 试剂盒均一度测定
        5.3.3 试剂盒的应用
    5.4 讨论
结论和展望
    结论
    展望
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]氨基糖苷类抗生素治疗重度革兰阴性菌感染方案的优化[J]. 王硕,刘明亮.  国外医药(抗生素分册). 2013(01)
[2]后抗生素时代来临[J]. 孙谊.  中国食品药品监管. 2012(10)
[3]根据药代动力学/药效动力学理论合理使用氨基糖苷类抗生素[J]. 施毅,李培.  中华结核和呼吸杂志. 2012 (10)
[4]氨基糖苷类抗生素耳毒性的保护和修饰[J]. 伍越,郑静,郑斌娇,方芳,梁玲芝,吕建新,管敏鑫.  中华耳科学杂志. 2012(02)
[5]一种高通量免疫检测抗生素残留方法的建立[J]. 刘爽,王伟,刘小雷.  中国抗生素杂志. 2012(03)
[6]超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中四环素类药物残留[J]. 钟伟龙,吴云普,吕飞,余优军,张奇华,杨培玉.  农业灾害研究. 2012(01)
[7]高效毛细管电泳法检测牛奶中的青霉素中间体以及3种青霉素类药物[J]. 田春秋,檀华蓉,高丽萍,沈虎琴,祁克宗.  色谱. 2011(11)
[8]化学发光酶免疫分析法快速测定牛奶中恩诺沙星的含量[J]. 张慧丽,于斐,张静,吴拥军,屈凌波.  中国食品卫生杂志. 2011(05)
[9]超声辅助萃取-高效液相色谱法测定牛奶中9种β-内酰胺抗生素残留[J]. 张尹,毕莉,徐兴志,杨亚玲.  云南大学学报(自然科学版). 2011(03)
[10]Elispot assay检测牛奶中庆大霉素[J]. 王丹,许杨,何庆华,黄志兵,康敏.  食品与生物技术学报. 2011(02)

硕士论文
[1]乳中抗生素残留微生物抑制法检测试剂的研究[D]. 封倩.内蒙古农业大学 2009



本文编号：3674700