鸭源新型鹅细小病毒分离鉴定与荧光定量PCR检测方法的建立
发布时间：2022-08-12 11:05
研究现状及研究意义:从2015年3月以来,在我国江苏、安徽、山东等地养鸭场陆续出现了以喙舌发育不良、舌头外露、生长缓慢、痢疾、瘫痪等为特征的传染性疾病,被称为“短喙-侏儒综合征”。据统计肉鸭死亡率为2%~6%,感染率在10%~30%,发病率严重的鸭场甚至能够达到50%,发病鸭由于喙舌发育不良而造成饮食困难,从而造成严重消瘦,体重比正常鸭降低20%~30%,由于生产性能的下降,严重威胁着肉鸭养殖业的经济效益。研究方法和结果:本研究通过琼脂扩散试验,PCR扩增试验及测序方法从泰安某病鸭场分离到1株鸭源新型鹅细小病毒。通过同源性分析,发现本试验获得的SD01毒株与国内外15个参考毒株的同源性在79.6%-98.5%之间。通过血凝试验,发现鸭源新型鹅细小病毒不能够凝集鸡、鸭和鹅的红细胞。由于检测鸭源新型鹅细小病毒的方法目前还不够完善,为提高其准确性和效率,本研究选择鸭源新型鹅细小病毒N-GPV基因作为目标基因,以阳性重组质粒作标准曲线,构建鸭源新型鹅细小病毒的荧光定量PCR检测方法。结果发现荧光定量PCR的溶解曲线均出现了窄而尖的单峰,说明引物具有特异性,可用于荧光定量PCR的扩增。N-GPV...
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鹅细小病毒简介
1.2 鹅细小病毒形态结构及理化特性
1.3 鹅细小病毒的培养特性
1.4 鹅细小病毒流行特点
1.5 鸭短喙侏儒综合症概述
1.6 鹅细小病毒诊断方法
1.6.1 临床诊断方法
1.6.2 血清学诊断方法
1.6.3 分子生物学方法
2 本研究的目的及意义
3 试验材料和方法
3.1 试验材料
3.1.1 病毒与试验动物
3.1.2 主要试剂及化学药品
3.1.3 主要仪器
3.1.4 主要试剂配制
3.2 试验方法
3.2.1 鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定
3.2.2 琼脂扩散试验
3.2.3 血凝试验
3.2.4 EID50的测定
3.2.5 SYBR GreenⅠ荧光定量检测新型鹅细小病毒(SD01 株)方法的建立
3.2.6 动物试验
4 试验结果
4.1 鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定
4.2 序列同源性和亲缘性分析结果
4.3 琼脂扩散试验
4.4 血凝试验
4.5 EID50 测定结果
4.6 荧光定量PCR检测GPV标准曲线的建立
4.7 荧光定量PCR特异性试验结果
4.8 荧光定量PCR敏感性试验结果
4.9 动物试验结果
4.9.1 组织病理变化
4.9.2 荧光定量PCR检测动物组织样品
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立与应用[J]. 窦砚国,陈浩,郑肖强,于相龙,杨晶,牛晓宇,刁有祥. 中国兽医学报. 2016(10)
[2]鸭短喙-侏儒综合征及其病原的初步研究[J]. 崔元,王建昌,李玉保,经美,张姗,陈萍,孙继国,袁万哲. 中国预防兽医学报. 2016(05)
[3]细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株致病性变化的研究[J]. 邵周伍林,李晨曦,刘明,张青山,张云. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[4]樱桃谷肉鸭源鹅细小病毒的分离与鉴定[J]. 陈翠腾,万春和,傅秋玲,傅光华,陈红梅,程龙飞,施少华,刘荣昌,黄瑜. 中国家禽. 2015(23)
[5]基于VP1基因的小鹅瘟病毒PCR快速检测方法的建立和应用[J]. 于新友,李天芝,沈志强. 水禽世界. 2015(03)
[6]快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立[J]. 赵磊,王旋,龚争,吴章青,张训海. 安徽科技学院学报. 2014(06)
[7]小鹅瘟的防治[J]. 孙明辉. 山东畜牧兽医. 2014(11)
[8]小鹅瘟的流行、诊断与综合防控[J]. 甄辉欣. 养殖技术顾问. 2014(11)
[9]鹅细小病毒细胞适应毒株基因序列分析[J]. 邱娜,邵周伍林,白小飞,张云,侯振中. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[10]我国小鹅瘟研究进展及成就[J]. 金文杰,吕亚楠,王芳,朱良全,秦爱建,丁家波. 微生物学通报. 2014(03)
博士论文
[1]鹅细小病毒非结构和结构蛋白B细胞线性抗原表位区的筛选[D]. 于天飞.东北农业大学 2007
[2]鹅细小病毒结构蛋白基因遗传进化分析及其基因免疫研究[D]. 赵丽荣.东北农业大学 2006
硕士论文
[1]鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定和全基因组序列测定分析[D]. 郑肖强.山东农业大学 2016
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及PCR-DHPLC检测方法的建立与初步应用[D]. 饶桂波.吉林农业大学 2013
[3]番鸭细小病毒的分离鉴定、VP基因的克隆及其原核表达[D]. 王欣.西南大学 2008
本文编号：3675763
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鹅细小病毒简介
1.2 鹅细小病毒形态结构及理化特性
1.3 鹅细小病毒的培养特性
1.4 鹅细小病毒流行特点
1.5 鸭短喙侏儒综合症概述
1.6 鹅细小病毒诊断方法
1.6.1 临床诊断方法
1.6.2 血清学诊断方法
1.6.3 分子生物学方法
2 本研究的目的及意义
3 试验材料和方法
3.1 试验材料
3.1.1 病毒与试验动物
3.1.2 主要试剂及化学药品
3.1.3 主要仪器
3.1.4 主要试剂配制
3.2 试验方法
3.2.1 鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定
3.2.2 琼脂扩散试验
3.2.3 血凝试验
3.2.4 EID50的测定
3.2.5 SYBR GreenⅠ荧光定量检测新型鹅细小病毒(SD01 株)方法的建立
3.2.6 动物试验
4 试验结果
4.1 鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定
4.2 序列同源性和亲缘性分析结果
4.3 琼脂扩散试验
4.4 血凝试验
4.5 EID50 测定结果
4.6 荧光定量PCR检测GPV标准曲线的建立
4.7 荧光定量PCR特异性试验结果
4.8 荧光定量PCR敏感性试验结果
4.9 动物试验结果
4.9.1 组织病理变化
4.9.2 荧光定量PCR检测动物组织样品
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立与应用[J]. 窦砚国,陈浩,郑肖强,于相龙,杨晶,牛晓宇,刁有祥. 中国兽医学报. 2016(10)
[2]鸭短喙-侏儒综合征及其病原的初步研究[J]. 崔元,王建昌,李玉保,经美,张姗,陈萍,孙继国,袁万哲. 中国预防兽医学报. 2016(05)
[3]细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株致病性变化的研究[J]. 邵周伍林,李晨曦,刘明,张青山,张云. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[4]樱桃谷肉鸭源鹅细小病毒的分离与鉴定[J]. 陈翠腾,万春和,傅秋玲,傅光华,陈红梅,程龙飞,施少华,刘荣昌,黄瑜. 中国家禽. 2015(23)
[5]基于VP1基因的小鹅瘟病毒PCR快速检测方法的建立和应用[J]. 于新友,李天芝,沈志强. 水禽世界. 2015(03)
[6]快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立[J]. 赵磊,王旋,龚争,吴章青,张训海. 安徽科技学院学报. 2014(06)
[7]小鹅瘟的防治[J]. 孙明辉. 山东畜牧兽医. 2014(11)
[8]小鹅瘟的流行、诊断与综合防控[J]. 甄辉欣. 养殖技术顾问. 2014(11)
[9]鹅细小病毒细胞适应毒株基因序列分析[J]. 邱娜,邵周伍林,白小飞,张云,侯振中. 黑龙江畜牧兽医. 2014(19)
[10]我国小鹅瘟研究进展及成就[J]. 金文杰,吕亚楠,王芳,朱良全,秦爱建,丁家波. 微生物学通报. 2014(03)
博士论文
[1]鹅细小病毒非结构和结构蛋白B细胞线性抗原表位区的筛选[D]. 于天飞.东北农业大学 2007
[2]鹅细小病毒结构蛋白基因遗传进化分析及其基因免疫研究[D]. 赵丽荣.东北农业大学 2006
硕士论文
[1]鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定和全基因组序列测定分析[D]. 郑肖强.山东农业大学 2016
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及PCR-DHPLC检测方法的建立与初步应用[D]. 饶桂波.吉林农业大学 2013
[3]番鸭细小病毒的分离鉴定、VP基因的克隆及其原核表达[D]. 王欣.西南大学 2008
本文编号：3675763
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