脂多糖诱导绵羊肺泡巨噬细胞转录组分析和NK-Lysin、GM-CSF表达及生物学功能研究

发布时间：2022-08-12 12:38

　　抗菌肽是一类含有半胱氨酸的阳离子肽,存在于多种生物中。能够抗革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌、原虫、病毒等多种微生物,是天然免疫反应的主要组成部分,是连接大然免疫和获得性免疫反应的纽带。抗菌肽能快速启动免疫系统,在机体抵抗病原微生物中具有重要作用。肺泡巨噬细胞是机体清除病原微生物的重要部位。LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁成分,LPS刺激TLRs后能引起炎症反应,激活巨噬细胞及单核细胞后能促使炎症因子的释放。因此本文以绵羊肺泡巨噬细胞为研究对象,利用转录组测序技术筛选免疫相关基因,并对所获得基因进行克隆、诱导表达以及生物学功能检测,为动物抗病育种与疫苗免疫佐剂的研究提供理论基础。本研究主要包括以下内容：（1）采用Solexa测序技术对绵羊肺泡巨噬细胞的转录组进行测序。对LPS诱导的肺泡巨噬细胞和未诱导的巨噬细胞分别进行测序,寻找免疫相关基因。将测序所得conting经拼接后获得67734条Uningene,其中发现54019条是新Unigene。其中64%Unigene与牛的基因序列具有同源性。差异表达基因GO功能显著性富集分析,发现182个免疫相关基因。未诱导巨噬细胞和诱导巨噬细胞之间存... 

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
目录
英文缩略词表
引言
第一章 文献综述 抗菌肽研究进展
    1 抗菌肽的分类与特点
        1.1 抗菌肽的分类
        1.2 抗菌肽的结构特点
    2 影响抗菌肽活性的因素
        2.1 抗菌肽自身因素
        2.2 生物膜因素
    3 抗菌肽的生物活性
        3.1 抗细菌活性
        3.2 抗病毒活性
        3.3 抗肿瘤活件
        3.4 抗寄生虫活性
    4 抗菌肽的应用前景
        4.1 饲料添加剂
        4.2 抗菌肽在临床中的应用
第二章 试验部分
    试验一 绵羊巨噬细胞转录组文库构建以及Solexa测序
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 绵羊肺泡巨噬细胞形态观察
            2.2 RNA检测
            2.3 转录组测序
        3 讨论
    试验二 NK-Lysin基因在毕赤酵母中的诱导表达
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 RT-PCR扩增与克隆载体酶切检测
            2.2 绵羊NK-Lysin基因进化树分析及蛋白结构预测
            2.3 重组质粒pPIC9K-NK-Lysin酶切鉴定
            2.4 多重拷贝子的筛选与鉴定
            2.5 诱导表达及SDS-PAGE检测
        3 讨论
    试验三 NK-Lysin基因在大肠杆菌中诱导表达及活性的初步检测
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 pET-32α-NK-Lysin质粒酶切鉴定
            2.2 NK-Lysin蛋白在DE_3中的表达
            2.3 NK-Lysin重组蛋白诱导条件优化
            2.4 NK-Lysin重组蛋白纯化与Western Blot分析
            2.5 抑菌活性检测
        3 讨论
    试验四 NK-Lysin在LPS不同诱导条件下及免疫器官中表达量动态分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 NK-Lysin与GAPDH基因的克隆
            2.2 标准曲线生成
            2.3 绵羊NK-Lysin基因在不同诱导情况下表达量分析
            2.4 绵羊NK-Lysin基因在不同免疫器官中的表达量分析
        3 讨论
    试验五 绵羊GM-CSF原核表达及对免疫细胞影响的观察
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 RT-PCR扩增
            2.2 基因序列分析
            2.3 GM-CSF蛋白结构的预测
            2.4 pET-32α-GM-CSF质粒酶切鉴定
            2.5 重组菌体蛋白的诱导表达
            2.6 GM-CSF对淋巴细胞增殖的影响
        3 讨论
结论
创新点
参考文献
附录
致谢
作者简历
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
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[2]人类疱疹病毒-2对HaCaT细胞表达GCSF和GMCSF的影响[J]. 邵勇,钟绮丽,万峻,张杰,张伟,于波.  中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2010(02)
[3]动物抗菌肽的抗病毒活性[J]. 赵洁,孙燕,李晶,李治.  医学分子生物学杂志. 2008(05)
[4]抗菌肽的功能及作用机理[J]. 吴德伟.  科技信息(学术研究). 2008(22)
[5]抗菌肽的结构特征及其与活性的关系[J]. 刘琳,马廷方,祝永强,姚菊明.  药物生物技术. 2008(01)
[6]α-螺旋型抗菌肽结构参数与功能活性的关系[J]. 董天堂,田子罡,王建华.  中国生物工程杂志. 2007(09)
[7]绵羊肺泡巨噬细胞的分离培养和形态学观察[J]. 盛金良,陈创夫,郑永峰,李有文,郝大坤.  石河子大学学报(自然科学版). 2007(01)
[8]阳离子抗菌肽的研究进展[J]. 文加才,秦永忠,宋爱刚.  国外医药(抗生素分册). 2002(06)
[9]抗菌肽酵母制剂的生产及其作饲料添加剂应用价值的探讨[J]. 温刘发,何丹林,张常明,翁照南,黄自然,毕英佐.  广东蚕业. 2001(02)
[10]抗菌肽的研究及其在水产上的应用前景[J]. 叶星,白俊杰.  大连水产学院学报. 2000(04)



本文编号：3675892