湖南省蛇华首属线虫感染情况调查及分子生物学鉴定

发布时间：2022-08-23 16:59

　　本研究在对湖南省蛇华首属线虫感染情况调查的基础上,对3种蛇华首属线虫进行了形态学和分子生物学鉴定,旨在为防治蛇线虫病提供科学依据。 本研究的第一部分对湖南省10个地区的蛇华首属线虫感染情况进行调查。结果显示,总感染率为39.36%,平均感染强度为15.66条／只（11.22～19.33条／只）,该线虫为优势虫种。受感染的蛇出现消化道症状与病变,故该线虫对蛇的危害程度颇大。 本研究的第二部分用形态学方法鉴定。印度华首线虫、环蛇华首线虫与短首华首线虫为分布于湖南省的3个虫种。 本研究的第三部分对3个种21株华首属线虫ITS基因进行克隆与序列分析。其ITS基因片段长度为750bp-797bp,种内相似性均高于98.4%,而种间相似性较低,为80%～89%。采用NJ法构建的种系发育树显示,同种均位于同一分支上,其所属的分支与其他线虫所属分支相隔较远。这与形态学得到的结果相一致,表明基于ITS基因的种系分析方法较为准确,ITS基因可作为蛇华首线虫可靠的分子遗传标记。 本研究在我国系首次对蛇华首线虫的感染情况进行全面而系统的调查并首次对该线虫进行分子生物学研究,为该线虫的分... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 蛇类养殖的重要性
        1.1.1 蛇的种类、分布与生态学意义
        1.1.2 蛇类的养殖与开发利用
        1.1.3 蛇类的资源现状与养殖前景
    1.2 蛇的线虫病
        1.2.1 种类与分布
            1.2.1.1 概况
            1.2.1.2 蛔虫
            1.2.1.3 显首科华首属线虫
        1.2.2 危害
            1.2.2.1 对蛇本身的危害
            1.2.2.2 对人类的危害
    1.3 利用ITS基因对蛇华首线虫进行鉴定
    1.4 研究内容与目的意义
        1.4.1 研究内容
        1.4.2 研究目的与意义
第二章 湖南省蛇华首属线虫感染情况调查
    2.1 材料
        2.1.1 样品来源
        2.1.2 试验器材
        2.1.3 试验试剂
    2.2 方法
        2.2.1 虫体采集
        2.2.2 虫体处理
            2.2.2.1 虫体固定
            2.2.2.2 虫体透明
            2.2.2.3 虫体制片
        2.2.3 虫体观察
        2.2.4 判定依据
    2.3 结果
        2.3.1 不同地区蛇华首线虫感染情况
        2.3.2 不同品种蛇华首线虫感染情况
        2.3.3 感染华首线虫蛇的临床症状与胃肠道病变
    2.4 讨论与小结
第三章 蛇华首属线虫的形态学鉴定
    3.1 材料
        3.1.1 虫体样品
        3.1.2 试验器材
        3.1.3 试验试剂
    3.2 方法
    3.3 结果
        3.3.1 寄生虫眼观形态
        3.3.2 寄生虫镜检形态
            3.3.2.1 印度华首线虫
            3.3.2.2 环蛇华首线虫
            3.3.2.3 短首华首线虫
    3.4 讨论与小结
第四章 蛇华首属线虫ITS序列分析
    4.1 材料
        4.1.1 虫体样品
        4.1.2 主要仪器与试剂
            4.1.2.1 仪器
            4.1.2.2 试剂
        4.1.3 配制溶液和培养基
            4.1.3.1 配制培养基
            4.1.3.2 配制溶液
            4.1.3.3 转化载体细胞
    4.2 试验步骤
        4.2.1 虫体DNA的制备
            4.2.1.1 试验用虫体的准备
            4.2.1.2 虫体DNA的提取
        4.2.2 华首属线虫ITS基因的PCR扩增及克隆
            4.2.2.1 琼脂糖凝胶电泳及结果观察
            4.2.2.2 PCR产物的纯化与连接
            4.2.2.3 重组质粒的转化与菌落的PCR鉴定
        4.2.3 ITS序列测定与分析及其种系发育分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 ITS序列的PCR扩增结果
        4.3.2 ITS序列测定结果
        4.3.3 ITS基因序列差异性分析
        4.3.4 基于ITS基因构建种系发育树
    4.4 讨论与小结
第五章 结论与创新点
    5.1 结论
    5.2 创新点
参考文献
本论文常用英文缩写
附图 核糖体DNA重复序列
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[4]华南虎蛔虫ITS及5.8S rDNA序列扩增及分析[J]. 王培园,陈武,贺现辉,袁子国,朱兴全,林瑞庆.  畜牧与兽医. 2010(09)
[5]江西蛇类多样性及其保护需求[J]. 汪玉如,周正彦,李丕鹏.  蛇志. 2010(02)
[6]岳阳市野生动物寄生虫感染情况调查[J]. 李旭红,刘毅,谢拥军.  中国动物传染病学报. 2010(03)
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[8]转录间隔区（ITS）在寄生虫分子生物学分类中的应用及其进展[J]. 牛庆丽,罗建勋,殷宏.  中国兽医寄生虫病. 2008(04)
[9]中国特有蛇类资源及保护建议[J]. 周正彦,李丕鹏,陆宇燕,董丙君.  四川动物. 2008(01)
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本文编号：3678147