石河子及北屯地区猪TTV及PCV2的基因检测及基因型分析

发布时间：2022-09-17 16:26

　　猪源输血传播病毒（Torque Teno virus，TTV）在世界大部分猪场都有较高的感染率。人源TTV感染人后，会发生重型肝炎等症状；圆环病毒2型（Circovirus type2，PCV2）是影响和诱发猪死亡和发病的重要病原之一。为了解石河子及北屯地区猪源TTV及PCV2的感染情况，并进一步研究猪源TTV与圆环病毒2型间是否存在协同影响的作用，本研究对在石河子地区及北屯地区猪源样品进行了TTV和PCV2的基因检测，并对流行毒株的基因型进行了分析。 研究中采用康为世纪公司的血液基因组小量提取试剂盒，对石河子屠宰场随机采集的206份猪抗凝血液、北屯地区屠宰场采集的72猪抗凝血液，及石河子周边猪场采集的不同日龄仔猪抗凝血液50份、母猪的抗凝血液10份进行DNA提取。根据相关数据合成了三对引物，建立了用于检测TTV1、TTV2及PCV2的聚合酶链反应（PolymeraseChain Reaction，PCR）检测方法，在此基础上，对反应条件进行了优化，建立了检测TTV1和PCV2的双重PCR检测方法。利用本研究建立的PCR检测方法，对采集样品进行检查，同时选取部分阳性样品，对PCR... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英语字母缩写和中英文全称对照表
前言
文献综述
    1 TTV 研究进展
        1.1 TTV 的分类及病原特点
            1.1.2 TTV 的病原特点
        1.2 TTV 的检测方法
            1.2.1 TTV 的 PCR 检测
            1.2.2 TTV 的基因分型
            1.2.3 TTV 的原位杂交检测法
        1.3 TTV 致病性
        1.4 TTV 传播途径
        1.5 TTV 流行情况研究
        1.6 TTV 病毒的治疗
    2 猪圆环病毒 2 型
        2.1 猪圆环病毒 2 型分类及病原特点
            2.1.1 猪圆环病毒 2 型分类
            2.1.2 猪圆环病毒 2 型病原特点
        2.2 PCV2 检测技术
            2.2.1 PCV2 的 PCR 检测
            2.2.2 PCV2 的原位杂交技术
            2.2.3 PCV2 的 ELISA 检测
        2.3 PCV2 的致病性
        2.4 猪圆环病毒病的临床表现
        2.5 PCV2 传播途径
        2.6 PCV2 流行情况
        2.7 PCV2 防治方法
    3 TTV 与 PCV2 混合感染研究
第一章 石河子及北屯地区 TTV 的 PCR 检测及不同日龄 TTV 的感染情况对比
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 血液样品
            1.1.2 主要仪器设备
            1.1.3 主要试剂
        1.2 主要方法
            1.2.1 引物设计
            1.2.2 总 DNA 提取
            1.2.3 PCR 扩增
            1.2.4 PCR 产物鉴定
            1.2.5 回收纯化 DNA 片段
            1.2.6 连接反应
            1.2.7 感受态细胞制备
            1.2.8 连接产物的转化
            1.2.9 序列测定分析
    2 结果
        2.1 PCR 检测结果
        2.2 阳性克隆 PCR 检测结果
        2.3 序列分析结果
        2.4 不同日龄仔猪及母猪感染率调查
    3 分析与讨论
第二章 石河子及北屯地区 PCV2 型 PCR 检测及基因型分析
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 样品采集
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器设备
        1.2 主要方法
            1.2.1 引物设计
            1.2.2 总 DNA 提取
            1.2.3 PCR 扩增
            1.2.4 PCR 产物鉴定
            1.2.5 回收纯化 DNA 片段
            1.2.6 连接反应
            1.2.7 连接产物的转化
            1.2.9 序列测定
            1.2.10 临床剖检
    2 结果
        2.1 PCR 检测结果
        2.2 测序结果
        2.3 同源性分析结果
        2.4 进化树分析结果
        2.5 临床剖检猪场中发现的突然死亡的仔猪
    3 讨论与结论
第三章 TTV1 与 PCV2 双重 PCR 检测方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 血液样品
            1.1.2 实验室使用器材
            1.1.3 主要试剂
        1.2 主要方法
            1.2.1 引物设计
            1.2.2 总 DNA 提取
            1.2.3 PCR 扩增
            1.2.4 双重 PCR 检测方法的建立
            1.2.5 PCR 产物鉴定
            1.2.6 回收纯化 DNA 片段
            1.2.7 感受态细胞制备
            1.2.8 连接反应
            1.2.9 连接产物的转化
            1.2.10 序列测定
            1.2.11 敏感性试验
    2 结果
        2.1 PCR 检测结果
            2.1.2 双重 PCR 反应条件的优化结果
            2.1.3 双重 PCR 的灵敏度试验
            2.1.4 双重 PCR 的重复性试验
            2.1.5 临床应用
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪Torque teno病毒广东株的PCR检测和序列分析[J]. 黄元,徐敏,陈少勤,王晓虎,向华,张健騑.  中国人兽共患病学报. 2012(10)
[2]2009年我国部分猪群输血传播病毒感染情况调查[J]. 訾占超,夏应菊,韩雪,汪葆玥,遇秀玲,翟新验,田克恭,倪建强.  中国预防兽医学报. 2011(10)
[3]猪圆环病毒Ⅱ型的研究进展[J]. 徐娜,李宝玉,娄忠子,柳纪省.  生物技术通报. 2010(06)
[4]猪圆环病毒病的流行及防控策略[J]. 徐苏标.  今日养猪业. 2009(06)
[5]我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析[J]. 王礞礞,周艳君,陈宗艳,于海,李国新,阎丽萍,姜一峰,侯军委,童光志.  中国预防兽医学报. 2009(10)
[6]猪圆环病毒2型致病机制研究进展[J]. 蒋大良,余兴龙.  动物医学进展. 2009(04)
[7]Torque teno virus:Its prevalence and isotypes in North India[J]. Mohammad Irshad,Shiwani Singh,Khushboo Irshad,Sanjay Kumar Agarwal,Yogendra Kumar Joshi.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)
[8]TTV病毒的研究现状[J]. 姜海艳,关伟君,蒋宏伟.  中国社区医师(综合版). 2007(10)
[9]陕西省PCV2感染的血清学调查[J]. 杨增岐,杨泽晓,姜艳芬,祝卫国,王旭荣,史怀平.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2006(04)
[10]西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查[J]. 刘秀清,宁金友,赵荣茂,董永森,李国泰,祁永秀,杨汉春.  中国兽医科学. 2006(02)

硕士论文
[1]江苏省规模化猪场PCV-2流行病学调查与断奶仔猪多系统衰竭综合症的防制[D]. 曹正.南京农业大学 2009
[2]猪圆环病毒PCR诊断方法建立及标准制订[D]. 王东方.河南农业大学 2008



本文编号：3679567