1,25（OH） 2 D 3 对牛肾细胞STC-1的表达作用及其凋亡的影响

发布时间：2022-09-24 21:02

　　维生素D除具备经典的钙磷稳态调节作用外,还参与到机体免疫和内分泌代谢等多种生理功能的调节中,对奶牛钙磷代谢紊乱也有一定的治疗作用。STC-1是一种类糖蛋白激素,在哺乳动物的多种组织中都有分布和表达,研究表明其在体内可以通过促进磷酸盐的吸收和重吸收、抑制钙的吸收来维特钙磷稳态的平衡。维生素D作为一种类固醇激素,参与到内分泌系统的调节中,如抑制甲状旁腺素（PTH）的合成与分泌和调节降钙素（CT）的分泌,但是其对反刍动物斯钙素-1（STC-1）的影响未见文献报道。此外,维生素D对细胞增殖和凋亡也有一定作用,作为药物使用时具有一定毒性,因此对其主要作用器官肾脏可能会产生损害。综上所述,本实验的目的是研究1,25（OH）2D3对牛肾细胞（MDBK细胞）STC-1表达的影响及其机制,以及1,25（OH）2D3对牛肾细胞增殖凋亡的影响。 本实验对牛肾细胞（MDBK细胞）进行培养,在细胞对数生长期添加1,25（OH）2D3处理。在探究1,25（OH）2D3对STC-1表达影响中,通过荧光定量PCR检测在1,25（OH）2D3对牛肾细胞STC-1的表达影响,并添加转录抑制剂放线菌素D （ActD）... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一部分 文献综述
    1 维生素D的研究进展
        1.1 维生素D概述
        1.2 维生素D的来源与吸收
        1.3 维生素D的作用
            1.3.1 维生素D对钙磷代谢的调节作用
            1.3.2 维生素D对免疫系统的作用
            1.3.3 维生素D对细胞增殖分化和凋亡的作用
        1.4 维生素D与疾病
            1.4.1 维生素D与骨骼疾病
            1.4.2 维生素D与肾脏疾病
            1.4.3 维生素D与肿瘤
            1.4.4 维生素D与高血压
        1.5 维生素D与其它因子
            1.5.1 维生素D与24-羟化酶
            1.5.2 维生素D与甲状旁腺激素
            1.5.3 维生素D与降钙素(CT)
            1.5.4 维生素D与胰岛素
        1.6 维生素D在动物生产上的研究
            1.6.1 维生素D在奶牛生产上的研究
            1.6.2 维生素D在猪生产上的研究
            1.6.3 维生素D在家禽生产上的研究
    2 STC-1的研究进展
        2.1 STC-1概述
        2.2 STC-1的基因和蛋白结构
        2.3 STC-1的分布和表达
        2.4 STC-1的作用
            2.4.1 STC-1对钙磷代谢的作用
            2.4.2 STC-1对生殖的作用
            2.4.3 STC-1对肿瘤的作用
第二部分 实验研究部分
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂及耗材
        1.3 主要仪器设备
        1.4 主要溶液及配置
    2 实验方法
        2.1 MDBK牛肾细胞的培养
            2.1.1 细胞培养
            2.1.2 细胞冻存和复苏
        2.2 实验分组
            2.2.1 探究1,25(OH)_2D_3对STC表达影响的实验分组
            2.2.2 探究1,25(OH)_2D_3对凋亡影响的实验分组
        2.3 荧光定量
            2.3.1 引物设计与合成
            2.3.2 RNA的提取
            2.3.3 反转录PCR
            2.3.4 荧光定量PCR
        2.4 AO/EB染色检测凋亡
        2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.6 数据处理结果
    3 结果与分析
        3.1 MDBK牛肾细胞培养
        3.2 RNA的提取和RT-PCR
            3.2.1 RNA的提取
            3.2.2 PCR扩增STC-1基因及测序
            3.2.3 荧光定量PCR
        3.3 1,25(OH)_2D_3对STC-1表达的影响
            3.3.1 不同浓度1,25(OH)_2D_3对STC-1表达影响
            3.3.2 1,25(OH)_2D_3作用不同时间对STC-1表达影响
            3.3.3 添加放线菌素D(ActD)及1,25(OH)_2D_3对STC-1表达影响
            3.3.4 添加放线菌铜(CHX)及1,25(OH)_2D_3对STC-1表达影响
        3.4 1,25(OH)_2D_3对牛肾细胞凋亡的影响
            3.4.1 AO/EB染色检测1,25(OH)_2D_3作用不同时间对细胞凋亡影响
            3.4.2 流式细胞仪检测1,25(OH)_2D_3作用不同时间对细胞凋亡影响
            3.4.3 流式细胞仪检测不同浓度1,25(OH)_2D_3对细胞凋亡影响
            3.4.4 1,25(OH)_2D_3作用不同时间对细胞Fas表达影响
            3.4.5 1,25(OH)_2D_3作用不同时间对细胞Bax和Bcl-2表达影响
    4 讨论
        4.1 1,25(OH)_2D_3对STC-1表达的影响
            4.1.1 1,25(OH)_2D_3对STC-1表达的上调作用
            4.1.2 1,25(OH)_2D_3上调STC-1表达的机制
        4.2 1,25(OH)_2D_3对牛肾细胞凋亡的影响
            4.2.1 1,25(OH)_2D_3对牛肾细胞的促凋亡作用
            4.2.2 1,25(OH)_2D_3在基因水平对细胞凋亡的影响
    5 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]补饲维生素D对畜禽钙磷代谢的影响[J]. 初冠群.  中国畜禽种业. 2012(04)
[2]1,25（OH）2D3对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响[J]. 赵丹,罗星,张春江,陈志刚,杨晓萍.  临床和实验医学杂志. 2011(07)
[3]过瘤胃维生素D预防围产期奶牛低血钙症的效果[J]. 王琳琳,夏成,舒适,刘知奇,徐闯,张洪友.  现代畜牧兽医. 2011(01)
[4]奶牛斯钙素-1研究进展[J]. 杨丰利,李小杉,何宝祥.  中国兽医杂志. 2010(05)
[5]2008-2009年反刍动物营养研究进展 Ⅵ.维生素[J]. 沈维军,王加启,卜登攀,兰欣怡.  中国畜牧兽医. 2010(04)
[6]人类斯钙素生物学特性的相关研究[J]. 张延涛,王静蓉,李晓燕.  医学综述. 2009(19)
[7]1,25-二羟维生素D3的免疫调节机制及其应用[J]. 胡雁,周善璧.  国际眼科杂志. 2008(02)
[8]维生素D3在动物生产中的研究与应用[J]. 李有超,程茂基.  畜禽业. 2006(16)
[9]维生素D在动物营养中的应用研究[J]. 冯志华,刘观忠,张义明.  中国畜牧兽医. 2004(08)
[10]维生素D3对断奶仔猪生长性能和免疫机能的影响[J]. 李德发,刘焕龙,席鹏彬,陈勇,李宇红.  中国农业大学学报. 2001(05)



本文编号：3680861