PRRSV NSP2缺失突变株的构建与生物学特性的研究

发布时间：2022-09-29 13:33

　　猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是危害养猪业的重要病毒病,临床表现以母猪的繁殖障碍、仔猪与成年猪的呼吸障碍为主要特征。2006年我国暴发了高致病性PRRSV（HP-PRRSV）,更是对养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV高度易变,加上我国批准使用的弱毒疫苗毒株较多,导致田间野毒与疫苗毒的重组现象频发,新的变异毒株不断出现,使我国PRRSV的防治面临巨大挑战。尽管弱毒疫苗有一定的免疫保护,但是在诱导交叉免疫,以及区分疫苗免疫与自然感染方面仍然存在很多问题。研究PRRSV基因缺失标记致弱毒,有可能为解决上述问题提供线索。非结构蛋白2（NSP2）是PRRSV基因组编码的一种高度变异性的蛋白,其中间的高变区可耐受碱基突变、插入以及大片段的缺失,而且,越来越多的证据显示PRRSV NSP2的变异与病毒的致病性有关,因此,NSP2是研究基因缺失标记致弱毒的重要候选区域。本实验室前期利用PRRSV/GSWW/2015毒株的感染性克隆成功构建了缺失NSP2第519-565位氨基酸的毒株（命名为D5）,在此基... 

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【学位级别】：硕士

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附表
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 文献综述
    1.1 简介
    1.2 PRRSV编码蛋白及功能
        1.2.1 PRRSV编码的非结构蛋白及功能
        1.2.2 PRRSV编码的结构蛋白及功能
    1.3 PRRSV NSP2的遗传变异
    1.4 PRRSV的免疫学特征
        1.4.1 PRRS的先天性免疫应答
        1.4.2 PRRS的适应性免疫应答
    1.5 PRRSV的防治
    1.6 研究目的与意义
第二章 PRRSV GSWW/2015株NSP2缺失病毒的拯救与鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 病毒、细胞、载体与抗体
        2.1.2 主要试剂及仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 NSP2缺失区域与引物的设计
        2.2.2 基因合成与感染性克隆的构建
        2.2.3 全长质粒线性化及DNA体外转录
        2.2.4 缺失病毒的拯救与传代
        2.2.5 拯救病毒的鉴定
    2.3 实验结果
        2.3.1 pGS-AB-D13/D14重组质粒的鉴定
        2.3.2 缺失病毒的拯救与传代
        2.3.3 缺失病毒的鉴定
    2.4 讨论
第三章 亲本病毒与缺失病毒的生物学特性分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 病毒株和细胞
        3.1.2 主要试剂及仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 引物设计与合成
        3.2.2 病毒的复制动力学曲线测定
        3.2.3 亲本病毒与拯救病毒TCID_(50)的测定
        3.2.4 病毒感染PAM细胞后相关细胞因子的表达
        3.2.5 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 病毒的复制动力学曲线
        3.3.2 病毒的TCID_(50)测定
        3.3.3 不同缺失病毒细胞因子表达的异同
    3.4 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3682686