2012-2013年江西省部分地区PEDV流行株的分子流行病学调查
发布时间：2022-10-15 11:52
猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus, PEDV）是引发猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea, PED）的原因。其属于冠状病毒科，冠状病毒属。PED对于不同年龄段及不同品种的猪都容易感染，是猪的一种拥有高度接触性的毁灭性的传染病，以哺乳仔猪最为严重，死亡率可达100%。其主要的临床症状以食欲不振、水样腹泻、呕吐、脱水，最后的酸中毒为基本特征。该病给养猪业形成了极度严重的经济损失，在我国及世界各养猪国家普遍分布。近年来，本病在我省发生率明显升高，因此，本研究对江西省不同地区的猪场进行PEDV感染及流行情况进行调查，并对流行毒株序列进行相关分析。 本实验利用MEGA5.0比较GenBank上所提供的PEDV-S基因序列，查找出其中最保守的序列，再应用DNAStar软件中的PrimemSelect按引物设计原则设计出一对引物，扩增长度为1139bp。通过条件优化反应，首先建立PEDV-S基因的RT-PCR扩增方法，结果退火温度以57.9℃条件为最优；利用该法对收集的134份江西地区疑似仔猪病毒性腹泻的粪便或小肠组织...
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
Abstract
第一部分：文献综述
1.1 猪流行性腹泻病毒的研究进展
1.1.1 病毒的分类和形态特征
1.1.2 病毒的理化特性
1.1.3 PEDV 的分子生物学特性
1.1.4 PEDV 的致病性
1.2 猪流行性腹泻病诊断方法的研究进展
1.2.1 病毒的分离与鉴定
1.2.2 微量血清中和实验
1.2.3 免疫荧光法
1.2.4 免疫电镜法
1.2.5 RT-PCR 法
1.2.6 ELISA 法
1.3 猪流行性腹泻的预防和治疗
1.4 本实验研究的目的和意义
第二部分 猪流行性腹泻病毒 S 基因 RT-PCR 扩增方法建立
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 PEDV RT-PCR 反应最适退火温度的确定
2.2.2 引物浓度范围的确定
2.2.3 敏感性实验
2.2.4 特异性实验
2.2.5 临床样品的检测结果
2.3. 小结与讨论
第三部分 猪流行性腹泻病毒的分子流行病学调查
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 PEDV S 基因的 RT-PCR 扩增结果：
3.2.2 PCR 产物的克隆与鉴定
3.2.3 测序结果与分析
3.3 小结与讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用[J]. 王金良,郭显坡,魏凤,沈志强. 中国兽医学报. 2010(10)
[2]猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 张坤,何启盖. 畜牧兽医学报. 2010(08)
[3]猪流行性腹泻病毒S基因片段的原核表达及其表达产物的反应原性[J]. 姜艳平,葛俊伟,汪淼,乔薪瑗,唐丽杰,刘兆磊,李一经. 中国兽医科学. 2009(07)
[4]Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J]. Jian-qiang LI 1,2,Ji-xing LIU 2,Xi LAN 2,Jie CHENG 1,Run WU 1,Zhong-Zi LOU2 Xiang-ping YIN2,Xue-rui LI2,Bao-yu LI2,Bin YANG2 and Zhi-yong LI2 (1. College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2. Key laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China). Virologica Sinica. 2009(03)
[5]猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻疫苗研究进展[J]. 刘岩,柏亚铎,鲁娜,董丽娜,胡桂学. 中国兽药杂志. 2007(02)
[6]猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR鉴别诊断[J]. 方立,徐辉,陈伟杰,赵灵燕,倪柏锋,方维焕. 浙江农业学报. 2006(02)
[7]流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建[J]. 余丽芸,侯喜林. 动物医学进展. 2005(05)
[8]流行性腹泻病毒E基因与pSFV重组RNA的构建[J]. 余丽芸,侯喜林. 黑龙江八一农垦大学学报. 2005(01)
[9]间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平[J]. 邹勇,唐永兰,苏万国,许大新,陈培龙,钱永清. 上海畜牧兽医通讯. 2000(01)
[10]猪流行性腹泻弱毒株的培育[J]. 佟有恩,冯力,李伟杰,王明,马思奇. 中国畜禽传染病. 1998(06)
本文编号：3691257
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
目录
摘要
Abstract
第一部分：文献综述
1.1 猪流行性腹泻病毒的研究进展
1.1.1 病毒的分类和形态特征
1.1.2 病毒的理化特性
1.1.3 PEDV 的分子生物学特性
1.1.4 PEDV 的致病性
1.2 猪流行性腹泻病诊断方法的研究进展
1.2.1 病毒的分离与鉴定
1.2.2 微量血清中和实验
1.2.3 免疫荧光法
1.2.4 免疫电镜法
1.2.5 RT-PCR 法
1.2.6 ELISA 法
1.3 猪流行性腹泻的预防和治疗
1.4 本实验研究的目的和意义
第二部分 猪流行性腹泻病毒 S 基因 RT-PCR 扩增方法建立
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 PEDV RT-PCR 反应最适退火温度的确定
2.2.2 引物浓度范围的确定
2.2.3 敏感性实验
2.2.4 特异性实验
2.2.5 临床样品的检测结果
2.3. 小结与讨论
第三部分 猪流行性腹泻病毒的分子流行病学调查
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 PEDV S 基因的 RT-PCR 扩增结果：
3.2.2 PCR 产物的克隆与鉴定
3.2.3 测序结果与分析
3.3 小结与讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用[J]. 王金良,郭显坡,魏凤,沈志强. 中国兽医学报. 2010(10)
[2]猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 张坤,何启盖. 畜牧兽医学报. 2010(08)
[3]猪流行性腹泻病毒S基因片段的原核表达及其表达产物的反应原性[J]. 姜艳平,葛俊伟,汪淼,乔薪瑗,唐丽杰,刘兆磊,李一经. 中国兽医科学. 2009(07)
[4]Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J]. Jian-qiang LI 1,2,Ji-xing LIU 2,Xi LAN 2,Jie CHENG 1,Run WU 1,Zhong-Zi LOU2 Xiang-ping YIN2,Xue-rui LI2,Bao-yu LI2,Bin YANG2 and Zhi-yong LI2 (1. College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2. Key laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China). Virologica Sinica. 2009(03)
[5]猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻疫苗研究进展[J]. 刘岩,柏亚铎,鲁娜,董丽娜,胡桂学. 中国兽药杂志. 2007(02)
[6]猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR鉴别诊断[J]. 方立,徐辉,陈伟杰,赵灵燕,倪柏锋,方维焕. 浙江农业学报. 2006(02)
[7]流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建[J]. 余丽芸,侯喜林. 动物医学进展. 2005(05)
[8]流行性腹泻病毒E基因与pSFV重组RNA的构建[J]. 余丽芸,侯喜林. 黑龙江八一农垦大学学报. 2005(01)
[9]间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平[J]. 邹勇,唐永兰,苏万国,许大新,陈培龙,钱永清. 上海畜牧兽医通讯. 2000(01)
[10]猪流行性腹泻弱毒株的培育[J]. 佟有恩,冯力,李伟杰,王明,马思奇. 中国畜禽传染病. 1998(06)
本文编号：3691257
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